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产品选择问题

胎牛血清的选购、操作方法与注意事项~

1. 如何储存和解冻血清才不会使产品质量受损?

答:

● 将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的是,溶解过程中必须规则地摇晃均匀。
● 长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。
● 我们建议血清应保存在-2O℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

2. 血清中包含絮状沉淀,它们是什么,怎么处理?

答:

● 沉淀包含纤维蛋白和脂蛋白。这是正常特性,不会影响产品性质。要除去沉淀,离心血清(400xg,1-2分钟)或者简单的让其沉淀在瓶子底部,将血清小心的转移到另一个无菌瓶里(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。大多情况轻轻摇动沉淀并加热至37℃就会再溶解。所以,使用产品时要摇动并加热血清至37℃,沉淀会自然消失。

3. 实验室如何选择适合的胎牛血清?

答:

● 国内一致认为Gibco的澳洲胎牛血清是最好的,但是根据我在北美的经历,国外一般认为Gibco比Hyclone好,所以并不是价格决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内Hyclone、Gibco并没有生产线,我们只能从代理商那里买,而代理商又鱼龙混杂,所以买到假货的可能性也很大。

● 我们公司提供的胎牛血清均保证质量、假一罚十、随货附带质检报告、严格管控上游供货渠道,保证客户买到物超所值正品品质胎牛血清,下面我们公司给老师推荐几款我公司主推的“价格由高到低”的胎牛血清产品(红字体货号为快速购买链接),推荐如下:

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4. 如何避免血清中产生沉淀?

答:

● 按如下操作可避免沉淀的产生:

⑴ 解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

⑵ 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。

⑶ 勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

⑷ 勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。

⑸ 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

⑹ 若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

5. 培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

答:

● 一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

6. 为什么要热灭活血清?

答:

● 加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

7. 有必要做热灭活吗?

答:

● 实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。
● 若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!

8. 细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

答:

● 一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。
● 细胞生长过老,破碎的细胞残骸。
● 血清质量不好,反复冻融的结果。
● 配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长。
● 配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点。
● 培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。

9. 细胞培养中如何防止黑点生成?

答:

● 尽可能地减少血清冻融次数。
● 培养基无需37℃水浴。
● 培养基保持最佳PH值7.0- 7.2。
● 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。
● 掌握细胞传代的最佳时机,细胞切勿生长过老。

10. 胎牛血清小牛血清有何区别与注意事项?

答:

● 来源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS)是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf Serum,CS)采自出生10至14天的小牛。
● 组份与比例不同:两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。
● 血清保存和使用须注意:血清应保存在-5℃至-20℃,若存放在4℃不可超过一个月。解冻血清时,应先将血清置于2-8℃冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,绝对不可将冷冻的血清直接放入37℃水浴或者温箱中,如放在37℃解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20℃保存,避免反复冻融。
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