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一. 透析袋的参数区别
透析袋的分类: | 纤维素透析袋 | 再生纤维素透析袋 | 普通型透析袋 |
分子量: | 分子量:1KD就是摩尔质量为1000分子量 | ||
化学兼容性: | 适用于:甲醇,乙醇和异丙醇等低碳醇(短时间、低浓度)。不适用于:强极性溶剂(如丙酮,甲乙酮,二恶烷) | 适用于:烃,卤代烃,醇,酮,酯,氧化物,含氮溶剂。不适用于:盐酸(浓度>25%),硝酸(浓度>25%),96%硫酸,25%高氯酸,1N氢氧化钾和10%的苯酚水溶液。 | 与很多盐兼容,比如CaCl2、(NH4)2SO4,还可与分子生物学和酶学常用的水溶剂和有机溶剂兼容,如异丙醇、乙醇、丙酮。 |
有机抗性: | 中等 | 好 | 好 |
污染物水平: | 不含重金属和硫化物 | 不含重金属和硫化物 | 硫化物<0.3%,重金属<50ppm |
包装: | 湿型,0.05%叠氮化钠 | 湿型,0.05%叠氮化钠 | 干型 |
扁平宽度: | 10,16,24,31mm | 10,12,18,24,28,38,45,50,53mm | 25,34,44,77mm |
PH范围: | 2-9 | 2-12 | 5-9 |
温度限度: | 37℃ | 60℃ | 可煮沸,可高压灭菌 |
预处理: | 无需预处理,只需用蒸馏水清洗即可使用 | 无需预处理,只需用蒸馏水清洗即可使用 | 在沸水或1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟 |
二. 透析袋的应用
1. 去除盐类,表面活性剂和溶剂
2. 样品溶液的缓冲液置换和PH值的调节
3. 浓缩蛋白质,多肽和抗体
4. DNA电洗脱
5. 电泳前稀释蛋白的制备
6. 小分子污染物清除
7. 结合研究
8. 组织培养的提取纯化
三. 透析袋的选择
1. 正确选择合适的截留分子量:截留分子量的选择是以预留在膜内的大分子的分子量和将要被除去的小分子污染物的分子量为基础的。为达到合理有效的分离,需分离的两种物质分子量的比率至少为25。
2. 选择截留分子量的经验法则:选择截留分子量值约为要保留的大分子分子量的一半,以获得至少90%的保留率。
3. 正确选择扁平宽度: 透析袋扁平宽度的选择取决于样品体积和透析容量。较小的透析管透析更快;较大的透析管因扩散距离较长透析较慢。为易于使用,建议使用总长(包括闭合夹和顶部空间)为大约10-15厘米的透析袋。
4. 透析袋的化学相容性:化学相容性主要用作使用指导,不作为化学相容的保证。温度,浓度,长时间曝光等因素的改变可能影响产品的使用。建议您自设条件进行测试。
四. 透析袋的透析过程
1. 下述透析程序是一个普遍的基础透析过程。在开始透析之前应考虑到许多变数。透析样品溶剂、膜的化学相容性、膜的截留分子量,透析溶剂、透析体积、温度等变量都会影响透析速率,因此,一些应用中下述透析过程可能需要适当的变化。
2. 把适量的透析液(缓冲液)加入透析装置。透析液的体积应为样品体积量的100倍(例如:在一升透析液中透析10毫升的样品)。
3. 裁剪适当长度的透析管。预留一段额外长度(约占总样品体积量的20%)作为头部空间。
4. 把透析管插入打开的透析夹,在约超出透析夹3-5毫米的位置再夹住。不要折叠透析袋。
5. 由透析管开口端将样品装入。调整一下顶部空间的长度,夹紧透析夹。
6. 把透析样品放在合适的透析缓冲液中。
7. 透析要根据具体的应用需求。通常情况下,允许过夜透析。在持续透析的过程中,至少要进行3次全部更换透析液。建议在(透析后)2-4小时,6-8小时和10-14小时(第2天早晨)更换透析液。在最后一次透析液的更换后要至少继续进行2小时的透析。注:对于高浓度污染物,样品可能需要较长的时间透析,透析液需要更频繁的更换。
8. 透析温度主要取决于样品。温度限制主要取决于膜的类型。纤维素透析袋可以承受的温度高达37℃,再生纤维素透析袋可以承受的温度高达60℃。
五. 透析袋的技术参数:
● PH 稳定范围:5-9。
● 污染物水平:硫化物<0.3%, 重金属<50ppm。
● 化学兼容性:与很多盐兼容,比如CaCl2,(NH4)2SO4,还可与分子生物学及酶学中常用的水溶剂、有机溶剂兼容,如异丙醇、乙醇和丙酮。
● 温度抵抗性:可煮沸,可高压灭菌。
● 蛋白吸附:每克透析袋吸附蛋白量小于1ng。
六. 透析袋的使用前处理
1. 将透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段;
2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟;
3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋;
4. 放在1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将透析袋煮沸10分钟;
5. 冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须带手套的;
6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净(2、3、4步骤可以省略用蒸馏水清洗)。
七. 透析袋的储存方法
在适当的储存情条件下,保质期为两年。干燥的透析袋要在室温或4℃储存在聚乙烯袋中。未开封的透析袋4℃储存。一旦变湿,透析袋应浸泡在下列之一的溶液中:0.05%叠氮化钠,1%的苯甲酸钠或1%甲醛。
备注:一旦变潮湿,不要让透析袋干燥。不断干燥会造成孔隙结构不可恢复的倒塌。