FP308/通用型qPCR荧光染料新品上市！适用所有荧光定量PCR机型，从此不再为高低Rox而烦恼~

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FP308/通用型qPCR荧光染料新品上市！适用所有荧光定量PCR机型，从此不再为高低Rox而烦恼~

FP308/AipMix 2×Universal SYBR Green qPCR SuperMix

产品储存：－20 ℃避光保存至少12个月。经常使用，解冻后可置于4˚C保存至少6个月，避免多次冻融。

制品说明：本制品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行Real TimePCR的专用2x预混试剂。采用爱普科学特异的新型双封闭HotStartTaq DNA Polymerase ，配以特异的双阳离子缓冲液和多种特异性促进因子，增强特异性，减少引物二聚体的形成，使得结果更加准确可靠。本制品已加入特殊的通用ROX参比染料，适应于所有qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度，只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。

注意事项：

1. 本制品已加入特殊的通用ROX参比染料，具有高通用性，可用于各种仪器。无论是需要添加ROX的仪器（如ABI 的各种需要高ROX或者低ROX机型），还是不需要添加ROX的仪器（如Roche LightCycler、Bio-Rad CFX96等机型），均适用于本制品。

2. 使用前请轻柔上下颠倒以混匀预混合试剂，请勿vortex避免产生过量气泡，影响定量结果。预混合试剂经混匀短暂离心后即可使用。

3. 本制品含SYBR Green I 强光下易分解，降低敏感度，使用时避免长时间强光照射本制品。

4. 建议在冰上配制PCR反应液，再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。

建议PCR条件(以20，50 μl反应体系为例，反应液配制请在冰上进行)

爱普科学/FP308通用型qPCR荧光染料新品上市！适用所有荧光定量PCR机型，从此不再为高低Rox而烦恼~(图1)

说明：本制品兼容性强，适用于不同厂家、型号的荧光定量PCR仪，绝大多数情况下使用二步法和三步法均可获得良好效果。在实际使用中可以根据机型推荐和具体情况对程序加以微调。一般来说，二步法扩增特异性高，三步法扩增效率高。如果融链曲线较差，可以尝试两步法扩增；若因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试加长延伸时间或者进行三步法PCR扩增。

荧光定量PCR实验常见问题和解决方案

Q1：无信号值出现

A1：

1. 反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。

2. 检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。

3. 引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。

4. 引物或探针的设计，如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。

5. 模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。

6. 模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

Q2： CT值出现过晚

A2：

1. 扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。

2. PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。

3. PCR产物太长。一般采用100-150bp的产物长度，一般不超过500bp。

Q3：标准曲线的线性关系不佳

A3：

1. 加样存在误差，使得标准品不呈梯度。

2. 标准品出现降解。应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。

3. 引物或探针不佳。重新设计更好的引物和探针。

4. 模板中存在抑制物，或模板浓度过高。

Q4：阴性对照也出现明显扩增

A4：

1. 反应体系或者水被污染：更换新的Mix或者水重复试验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。

2. 引物二聚体的出现：一般在35循环以后阴性对照出现扩增属正常情况，可配合融解曲线进行分析。

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FP308/AipMix 2×Universal SYBR Green qPCR SuperMix

产品储存：－20 ℃避光保存至少12个月。经常使用，解冻后可置于4˚C保存至少6个月，避免多次冻融。

注意事项：

2. 使用前请轻柔上下颠倒以混匀预混合试剂，请勿vortex避免产生过量气泡，影响定量结果。预混合试剂经混匀短暂离心后即可使用。

3. 本制品含SYBR Green I 强光下易分解，降低敏感度，使用时避免长时间强光照射本制品。

4. 建议在冰上配制PCR反应液，再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性，减少背景。

建议PCR条件(以20，50 μl反应体系为例，反应液配制请在冰上进行)

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Q1：无信号值出现

A1：

1. 反应循环数不够。一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环（如至45cycles），但高于45个循环会增加过多的背景信号。

2. 检测荧光信号的步骤有误。一般SG法采用72℃延伸时采集，Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。

3. 引物或探针降解。可通过PAGE电泳检测其完整性。

4. 引物或探针的设计，如探针高于引物的温度不够，造成探针未杂交上而产物已延伸的情况。

5. 模板量不足。对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。

6. 模板降解。避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。

Q2： CT值出现过晚

A2：

1. 扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物或探针；用三步法进行反应；适当降低退火温度；增加镁离子浓度等。

2. PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。

3. PCR产物太长。一般采用100-150bp的产物长度，一般不超过500bp。

Q3：标准曲线的线性关系不佳

A3：

1. 加样存在误差，使得标准品不呈梯度。

2. 标准品出现降解。应避免标准品反复冻融，或重新制备并稀释标准品。

3. 引物或探针不佳。重新设计更好的引物和探针。

4. 模板中存在抑制物，或模板浓度过高。

Q4：阴性对照也出现明显扩增

A4：

1. 反应体系或者水被污染：更换新的Mix或者水重复试验。反应体系在超净工作台内配制，减少气溶胶污染。

2. 引物二聚体的出现：一般在35循环以后阴性对照出现扩增属正常情况，可配合融解曲线进行分析。

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