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储存条件:冰块运输,-20℃保存,保质期一年,避免反复冻融。
产品说明:
本SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种极其强烈的细胞组织快速裂解液并获得总蛋白质,其裂解液强度大于NP-40裂解液、RIPA裂解液(弱)、RIPA裂解液(中)、Western及IP细胞裂解液,所获得的蛋白质可以用于Western、染色质免疫共沉淀(ChIP)等。
SDS Lysis Buffer主要由Tris-HCI、NaCl、SDS等组成,并含有多种蛋白酶抑制剂成分,可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
使用方法(仅供参考):
一、对于培养细胞样品:
1. 室温融解SDS裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 裂解细胞
贴壁细胞: | 去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中的蛋白没有干扰,可不洗)。按照6孔板每孔加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。 |
悬浮细胞: | 离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。 |
3. 充分裂解后,10000-12000xg离心5-10分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注:通常6孔板每孔细胞加150uL裂解液已足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200uL或250uL。
二、对于组织样品:
1. 室温融解SDS裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 把组织剪切成细小的碎片。
3. 按照每20mg组织加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。)
4. 用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-12000xg离心5-10分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。
注:如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
注意事项:
1. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。如果所提蛋白样品用于CHIP实验,应置于冰上或4℃裂解15~30min。
2. 为取得最佳的使用效果,尽量避免过多的反复冻融,可以适当分装后使用。
3. 融解SDS裂解液时,应尽量缩短融解时间,避免裂解液中的有效成分失效。
4. 可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套和口罩操作。
6. 本产品仅限专业人士的科研使用,严禁用于临床诊断和药物等用途。
品牌: | 爱普科学 |
英文名称: | SDS Lysis Buffer |
规格: | 100mL |
性状: | 液体 |
储存温度: | -20℃ |
保质期: | 12个月 |
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