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保存条件:2-8℃运输和避光保存,有效期12个月。加入蛋白酶抑制剂后建议适量分装-20°C冻存,避免反复冻融。
产品简介:
RIPA裂解液是一种经典的细胞组织快速裂解液,对动物细胞膜、胞浆、胞核成分均有较强的裂解作用,裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP等。RIPA的本意是Radio Immunoprecipitation Assay。RIPA裂解液的配方有很多种,根据其裂解液的强度大致可以分为强、中、弱三类。
RIPA裂解液(弱)的主要成分为50mM Tris-Hcl(pH7.4),150mM NaCI,1% NP-40,0.25% Sodium Deoxycholate,以及Sodium Orthovanadate,Sodium Fluoride,EDTA等。本产品需要和常规的蛋白酶抑制剂一起使用,以达到更好的提取效果。本产品含有磷酸酶抑制剂,可用于提取磷酸化蛋白。
用RIPA裂解液(弱)裂解得到的蛋白样品,可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒(货号:P301)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
使用说明:
1. 自备蛋白酶抑制剂或PMSF,防止蛋白降解。RIPA裂解液在临用前需加入蛋白酶抑制剂,充分混匀。或者取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的最终浓度为1mM。
2. 根据样品的类型进行如下操作:
对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中的蛋白没有干扰,可不洗)。按照6孔板每孔加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液,用移液器吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
对于悬浮细胞:离心收集细胞,去除培养基,用手指把细胞用力弹散,按照6孔板每孔细胞加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分,而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触,相对比较容易裂解充分。
对于组织样品:把组织剪切成细小的碎片。按照每20mg组织加入150-250uL裂解液的比例加入裂解液,如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解液的用量。使用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
3. 样品充分裂解后,4°C 10000-14000xg离心3-5min,取上清,即可进行后续的PAGE、Western-Blots、免疫沉淀和免疫共沉淀等实验操作。
说明:裂解液用量通常6孔板每孔细胞加150uL裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200-250uL。
注意:RIPA裂解液(弱)的裂解产物中经常会出现透明胶状物,其主要成分为基因组DNA,当检测的目标蛋白不与基因组DNA紧密结合,可以直接离心裂解产物,取上清液用于后续实验;如果目的蛋白与基因组DNA结合非常紧密,可通过超声处理打碎打散透明胶纸物,随后离心取上清用于后续实验。
注意事项:
1. 需自备蛋白酶抑制剂或PMSF。裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。
2. 关于裂解液,也需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅供科研使用,严禁用于临床诊断和药物等。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | RIPA Lysis Buffer(Mild) |
规格: | 100mL |
性状: | 液体 |
储存温度: | 2-8℃ |
保质期: | 12个月 |
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