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10× 快速电泳转膜液(免冰浴)/10× Fast Western Blot Transfer Buffer

货号:P413-01

品牌:爱普科学

货期:现货

价格:120

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储存条件:常温运输,4℃保存,保质期12个月。

产品介绍:快速转膜液使用独特配方,能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF 膜或 NC 膜)上。使用湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)方法,能在10-40 min 完成转膜过程。

产品特点:

快速和环保——快速转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。

兼容性较好——快速转膜液能兼容 Laemmli 胶,预制胶,Bis-Tris 胶等多种凝胶。

转移效率高——快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。

使用说明:转膜前的准备:裁好的滤纸、裁好的转印膜、1×快速转膜液、无水甲醇(处理PVDF膜用)、无水乙醇。

一、湿转法(Tank Blot):

1. 按照下表配制1× 电泳转膜液:


1× 电泳转膜液配置量

100mL

500mL

1000mL

10× 电泳转膜液

10mL

50mL

100mL

无水乙醇

20mL

100mL

200mL

超纯水

70mL

350mL

700mL

2. 将滤纸和海绵浸泡在1× 电泳转膜液中,完全没湿,平衡5分钟。

3. PVDF膜使用前要用无水甲醉润湿30秒,随后浸泡在1× 电泳转膜液中,完全浸湿平衡5分钟。

4. 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS,随后将凝胶浸泡在1× 电泳转膜液中。

注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。

5. 按照以下顺序做好转印三明治结构:

           负极(阴极)

           海锦

           滤纸

           凝胶

           转印膜

           滤纸

           海绵

           正极(阳极)

注意:要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加1× 电泳转膜液保持三明治结构湿润。三明治结构太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧,可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。

6. 将三明治结构放于转移槽中,转印槽中灌满1× 电泳转膜液。

7. 湿转推荐使用恒流转移:


恒电流

转移时间

降温措施

一张膜

375mA

35-40min

不需要

两张膜

375mA

35-40min

需要

二、半千转(Semi-Dry Blot):

1. 按照下表配制1× 电泳转膜液:


电泳转膜液配置量

100mL

500mL

1000mL

10× 电泳转膜液

10mL

50mL

100mL

无水乙醇

20mL

100mL

200mL

超纯水

70mL

350mL

700mL

2. 将滤纸和海绵浸泡在1× 电泳转膜液中,完全浸湿。

3. PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒,随后浸泡在1× 电泳转膜液中,完全浸湿,平衡5分钟。

4. 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS,随后将凝胶浸泡在1× 电泳转膜液中。

注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转格。

5. 按照以下顺序做好转印三明治结构:

           负极(阴极)

           下层滤纸

           凝胶

           转印膜

           上层滤纸

           正极(阳极)

注意:半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸≥膜≥胶≥上层滤纸。上下两层滤纸一定不能接触:滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡;接触的滤纸和气泡会造成短路。

6. 半干转推荐使用恒压转移:25V,10-20分钟。

注意事项:

1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

2. 本产品仅供专业人员的科研使用,严禁用于临床诊断和药物等用途。

间题解决:

问题描述

可能原因

解决方法

转膜不充分

湿转转移槽铂金丝有盐沉淀。

彻底用超纯水清洗转移槽。

转移膜、滤纸、凝胶没有在1× 电泳转膜液中彻底平衡。

转移膜、滤纸、凝胶要在1× 电泳转膜液中平衡5分钟,震荡平衡更好。

PVDF膜没有用甲醇预处理。

PVDF膜要用甲醇彻底润湿,然后在1× 电泳转膜液中平衡5分钟。

转膜时间不充分。

适当延长转膜时间。

不连续的转膜

凝胶和膜之间有气泡。

转膜三明治做好后,用滚轴把凝胶和膜之间的气泡赶走

PVDF膜没有用甲醇预处理。

PVDF膜要用甲醇润湿,然后在1× 电泳转膜液中平衡3-5分钟。

转膜设备不工作

电泳电源不配套。

电泳电源要符合以下参数:300W,5-300V,0.01-3A。

品牌: 爱普科学
英文名称: 10× Fast Western Blot Transfer Buffer
规格: 500mL
性状: 液体
储存温度: RT
保质期: 12个月
地址:北京市昌平区北清路1号珠江摩尔国际大厦5号楼2单元305
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