10× 快速电泳转膜液(免冰浴)/10× Fast Western Blot Transfer Buffer
货号:P413-01
品牌:爱普科学
货期:现货
价格:¥120
- 产品介绍
- 商品属性
- 资料下载
- 产品问答
储存条件:常温运输,4℃保存,保质期12个月。
产品介绍:快速转膜液使用独特配方,能高效快速地将蛋白转移到印迹膜(PVDF 膜或 NC 膜)上。使用湿转法(Tank blot)或半干转法(Semi-dry blot)方法,能在10-40 min 完成转膜过程。
产品特点:
快速和环保——快速转膜液不使用甲醇,减轻了对实验者和环境的伤害。
兼容性较好——快速转膜液能兼容 Laemmli 胶,预制胶,Bis-Tris 胶等多种凝胶。
转移效率高——快速转膜液对分子量跨度较大的蛋白也有很好的转移效率,有效解决了大小蛋白不能在同一张膜上同时转移的问题。
使用说明:转膜前的准备:裁好的滤纸、裁好的转印膜、1×快速转膜液、无水甲醇(处理PVDF膜用)、无水乙醇。
一、湿转法(Tank Blot):
1. 按照下表配制1× 电泳转膜液:
1× 电泳转膜液配置量 | |||
100mL | 500mL | 1000mL | |
10× 电泳转膜液 | 10mL | 50mL | 100mL |
无水乙醇 | 20mL | 100mL | 200mL |
超纯水 | 70mL | 350mL | 700mL |
2. 将滤纸和海绵浸泡在1× 电泳转膜液中,完全没湿,平衡5分钟。
3. PVDF膜使用前要用无水甲醉润湿30秒,随后浸泡在1× 电泳转膜液中,完全浸湿平衡5分钟。
4. 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS,随后将凝胶浸泡在1× 电泳转膜液中。
注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转移。
5. 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)
海锦
滤纸
凝胶
转印膜
滤纸
海绵
正极(阳极)
注意:要彻底清除三明治结构中的气泡,适当补加1× 电泳转膜液保持三明治结构湿润。三明治结构太紧和太松都会影响转印效果。如果太紧,可以去除阳极一侧的海绵或滤纸。
6. 将三明治结构放于转移槽中,转印槽中灌满1× 电泳转膜液。
7. 湿转推荐使用恒流转移:
恒电流 | 转移时间 | 降温措施 | |
一张膜 | 375mA | 35-40min | 不需要 |
两张膜 | 375mA | 35-40min | 需要 |
二、半千转(Semi-Dry Blot):
1. 按照下表配制1× 电泳转膜液:
1× 电泳转膜液配置量 | |||
100mL | 500mL | 1000mL | |
10× 电泳转膜液 | 10mL | 50mL | 100mL |
无水乙醇 | 20mL | 100mL | 200mL |
超纯水 | 70mL | 350mL | 700mL |
2. 将滤纸和海绵浸泡在1× 电泳转膜液中,完全浸湿。
3. PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒,随后浸泡在1× 电泳转膜液中,完全浸湿,平衡5分钟。
4. 将凝胶在超纯水中浸泡漂洗2分钟,去除胶表面的SDS,随后将凝胶浸泡在1× 电泳转膜液中。
注意:水中漂洗时间一定不能超过2分钟,否则分子量较大的蛋白不能完全转格。
5. 按照以下顺序做好转印三明治结构:
负极(阴极)
下层滤纸
凝胶
转印膜
上层滤纸
正极(阳极)
注意:半干转时,滤纸、胶、膜之间的大小,一般是下层滤纸≥膜≥胶≥上层滤纸。上下两层滤纸一定不能接触:滤纸、胶、膜之间千万不能有气泡;接触的滤纸和气泡会造成短路。
6. 半干转推荐使用恒压转移:25V,10-20分钟。
注意事项:
1. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2. 本产品仅供专业人员的科研使用,严禁用于临床诊断和药物等用途。
间题解决:
问题描述 | 可能原因 | 解决方法 |
转膜不充分 | 湿转转移槽铂金丝有盐沉淀。 | 彻底用超纯水清洗转移槽。 |
转移膜、滤纸、凝胶没有在1× 电泳转膜液中彻底平衡。 | 转移膜、滤纸、凝胶要在1× 电泳转膜液中平衡5分钟,震荡平衡更好。 | |
PVDF膜没有用甲醇预处理。 | PVDF膜要用甲醇彻底润湿,然后在1× 电泳转膜液中平衡5分钟。 | |
转膜时间不充分。 | 适当延长转膜时间。 | |
不连续的转膜 | 凝胶和膜之间有气泡。 | 转膜三明治做好后,用滚轴把凝胶和膜之间的气泡赶走 |
PVDF膜没有用甲醇预处理。 | PVDF膜要用甲醇润湿,然后在1× 电泳转膜液中平衡3-5分钟。 | |
转膜设备不工作 | 电泳电源不配套。 | 电泳电源要符合以下参数:300W,5-300V,0.01-3A。 |
品牌: | 爱普科学 |
英文名称: | 10× Fast Western Blot Transfer Buffer |
规格: | 500mL |
性状: | 液体 |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
最新发布
-
PVDF免疫印迹膜 PVDF Western Blotting Membranes 0.2um 30cm*3M
一般描述PVDF免疫印迹膜是疏水性的聚偏二氟乙烯(PVDF)...
¥2451 -
针式过滤器,焊接式,PVDF/亲水聚偏氟乙烯,13mm*0.45um(进口膜)
针式过滤器 进口膜 焊接式 PVDF(亲水聚偏氟乙烯) 13...
¥340 -
透析袋(宽10MM/直径6MM/1000分子量)
透析袋,宽10MM,直径6MM,1000分子量
¥530 -
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE),100mg/1ml
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE) ...
¥400