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储存条件:室温运输, 4℃保存,保质期12个月。
制品说明:本产品利用聚丙烯酰胺凝胶电泳原理,采用优化的预混合配方和通用分离/浓缩胶配制缓冲液,分离胶/浓缩胶可以同时一次配制完成。因此极大程度上简化了凝胶制备的操作流程,降低了实验人员接触剧毒试剂的机率。只需要一个凝胶制备系统,一小时内可以快速、方便、安全、稳定的配制出各种浓度的高质量的SDS-聚丙烯酰胺凝胶,适用于各个实验室的蛋白电泳和制胶设备,比预制胶更加灵活、经济。
注意事项:需自备30%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液(Acr-Bis solution,推荐36.5:1,丙烯酰胺146克和甲叉双丙4克溶于纯水,定容到500mL)、10% APS(过硫酸铵)、TEMED。
操作步骤:
1. 建议配胶条件(以两块Mini Gel 配制10 mL 体系为例)
Components | separating Gel | Condensing Gel | |||
6% | 8% | 10% | 12% | ||
Acr-Bis solution | 2mL | 2.67mL | 3.33mL | 4mL | 0.67mL |
4x PAGE buffer | 2.5mL | 2.5mL | 2.5mL | 2.5mL | 1mL |
H20 | 5.5mL | 4.83mL | 4.17mL | 3.5mL | 2.3mL |
10% APS | 50μL | 50μL | 50μL | 50μL | 30μL |
TEMED | 5μL | 5μL | 5μL | 5μL | 5μL |
2. 上表说明:
1) 配制不同浓度的分离胶只需要调整Acr-Bis solution 的用量并相应的增加减少H20的用量即可,使终体积依旧保持在10 mL。可按照以下公式计算:配制Y%浓度胶需要的Acr-Bis solution= [(Y% *10mL)/30%] mL,12%浓度胶需要的Acr-Bis solution= [(12% *10mL)/30%] mL=4mL;配制Y%浓度胶需要补足用水量(H20)=10mL - 2.5mL - [(Y% *10mL)/30%] mL,12%浓度胶需要的补足用水量(H20)=10mL - 2.5mL - [(12% *10mL)/30%] mL =10mL - 2.5mL - 4mL=3.5mL
2) 浓缩胶和分离胶使用相同的4x PAGE buffer(通用分离/浓缩胶配制缓冲液),因此配制时用的成分完全一致,只是体积不同。
3. 准备两个洁净的小烧杯(分离胶和浓缩胶各用一个烧杯,同时准备),按照上表将分离胶/浓缩胶的前三个组分(APS和TEMED不加)依次分别加入小烧杯内(分离胶和浓缩胶同时准备,所需成分相同,只是吸取体积不同,因此吸取相同溶液时不用更换枪头),分别混匀,封口膜封好装浓缩胶混合液的小烧杯口4℃冰箱保存备用。
4. 装分离胶混合液的小烧杯内再加入APS和TEMED,以枪头搅拌约10-20 sec混匀,灌胶后立即再在胶面上小心地铺上一几毫米厚的水层(这可使凝固后的胶面平滑整齐),然后于室温凝固20-40 min(37℃可提高凝胶速度)。
5. 当能轻易观察到因固液相折光率不同形成的细线时,表明胶体充分凝聚。此时倒出蒸馏水,尽量吸干残余液体。
6. 从冰箱取出备用的装有浓缩胶混合液的小烧杯,加入APS和TEMED,枪头搅拌均匀,灌胶后插入梳子,然后于室温或者37℃凝固15-30 min。凝固的胶连带其附着的玻璃板用塑料薄膜严密包裹可在4℃冰箱保存2-4天,长时间保存易干胶,要重新做胶。
注意事项:
1. 蛋白凝胶制作中的某些成分有毒性,如丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺,因此制胶过程中必须带手套。
2. APS(过硫酸铵)溶液容易失活,短时间内使用可放4℃冰箱,长期保存,应分装后放-20℃。
3. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
4. 本产品仅供科研用途,不用于临床诊断。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | General SDS-PAGE Separation Gel and Concentrated Gel Buffer |
规格: | 100ml |
性状: | 液体 |
储存温度: | 2-8℃ |
保质期: | 12个月 |
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