保存条件：4℃运输，-20℃保存，有效期12个月。

产品简介：

    Western及IP细胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation, IP)和免疫共沉淀 (CO-IP)。

    Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCI，1% Triton X-100，以及Sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3-V04，Leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100 等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

使用说明：

对于培养细胞样品：

1. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为1mM。

2. 对于贴壁细胞：去除培养液，用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(若血清中的蛋白没有干扰，可不洗)。按 照6孔板每孔加入100-200uL裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下，使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后，细胞就会被裂解。

3. 对于悬浮细胞：离心收集细胞，用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孑L细胞加入100-200uL裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应无明显的细胞沉淀。如果细胞量较多，必需分装成50-100万细胞/ 管后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

4. 充分裂解后，10000-14000xg离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等实验操作。

裂解液用量说明：通常6孔板每孔细胞加100uL裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高，可以适当加大裂解液的用量到150uL或200uL。

对于组织样品：

1. 把组织剪切成细小的碎片。

2. 融解Western及IP细胞裂解液，混匀。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入PMSF，使PMSF的最终浓度为 1mM。

3. 按照每20mg组织加入100-200uL裂解液的比例加入裂解液。

注：如果裂解不充分可以适当添加更多的裂解液，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

4. 用玻璃匀浆器匀浆，直至充分裂解。

5. 充分裂解后，10000-14000g离心3-5分钟，取上清，即可进行后续的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等实验操作。

6. 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

注意事项：

1. 为取得最佳的使用效果，尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2. 需自备PMSF。

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4°C进行。

4. 可能需要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液。

5. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 本产品仅供科研使用，严禁用于临床诊断和药物等。

产品说明书.pdf