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储存条件:本产品收到后按照上面指示温度存放各成份,至少一年内有效。蛋白标准试剂长期保存-20℃放置,常温运输。
产品介绍:BCA(Bicinchoninic Acid)法蛋白浓度定量试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一BCA法基础上改进而成。众所周知,二价铜离子在碱性的条件下,可以被蛋白质还原成一价铜离子(Biuret Reaction),一价铜离子和独特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用产生敏感的颜色反应。两分子的BCA螯合一个铜离子,形成紫色的反应复合物。该水溶性的复合物在562nm处显示强烈的吸光性,吸光度和蛋白浓度在广泛范围内有良好的线性关系,因此根据吸光值可以推算出蛋白浓度。
产品特点:
1. 步骤简单,45分钟内完成测定,比经典Lowry法快4倍而且更加方便。
2. 灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。
3. BCA法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的去污剂等化学物质的影响,可以兼容样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,60,80。
4. 在20-2000μg/ml浓度范围内有良好的线性关系。
5. 检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
操作步骤(实验前请先阅读注意事项):
1. 使用时将Solution A摇晃混匀,根据样品数量,按50体积Solution A加1体积 Solution B(50:1)配制适量BCA工作液,充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 完全溶解蛋白标准品(5mg/ml BSA),取10μl稀释至100μl,使终浓度为0.5mg/ml。蛋白样品在什么溶液中,蛋白标准品也宜用什么溶液稀释。但是为了简便起见,也可以用0.9%NaCl或PBS稀释蛋白标准品。
3. 步骤3:将稀释后标准品(0.5mg/mlBSA)按0,1,2,4,8,12,16,20μl分别加到96孔板中,加标准品稀释液补足到20μl。
4. 加适当体积样品到96孔板的样品孔中,加标准品稀释液补足到20μl。
5. 各孔加入200μl BCA工作液,用加样枪轻轻吹打混匀(注意不要弄出气泡影响读数)37℃放置30-60分钟。
注:也可以根据需要在室温放置2小时,或60℃放置30分钟。BCA法测定蛋白浓度时,吸光度会随着时间的延长不断加深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低,适合在较高温度孵育,或延长孵育时间。
6. 冷却到室温后,用酶标仪或者分光光度计测定A562,或540-590nm之间的其它波长的吸光度。
7. 根据标准曲线计算出样品中的蛋白浓度。
注意事项:
1. 蛋白标准试剂请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
2. Solution A和Solution B混合成工作液时可能会有浑浊,但充分振荡混匀后就会消失,成为淡绿色的透明溶液。
3. 需酶标仪一台,测定波长为540-590nm之间,562nm最佳;需96孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但是测定蛋白浓度时,需根据测定吸光度的杯子的体积,按比例调整A液,B液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
4. BCA蛋白定量试剂盒受螯合剂和略高浓度的还原剂的影响,需确保无EGTA,EDTA低于10mM,二硫苏糖醇低于1mM,β-巯基乙醇低于1mM。不适用BCA法时建议使用Bradford法蛋白定量试剂盒。还可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
5. 为了加快BCA法测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但是切勿过热。
6. 如发现样品稀释液或裂解液本身就有较高背景,请试用Bradford法蛋白定量试剂盒。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8. 本产品仅供科研用途,不用于临床诊断和药物等。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | BCA Protein Assay Kit |
规格: | 200T/500T/2500T |
性状: | 液体 |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
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