CCK-8细胞增殖检测试剂盒/Cell Counting Kit(CCK-8)
货号:C201-01
品牌:爱普科学
货期:现货
价格:¥160
- 产品介绍
- 商品属性
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- 产品问答
储存条件:4℃运输和保存,保质期一年;-20℃长期保存,保质期两年,避免反复冻融。
产品概述:CCK-8试剂盒,是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏检测试剂盒。WST-8是一种类似于MTT的化合物,在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下,可以被还原生成橙黄色水溶性的甲臜(Formazan)。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。
使用方法:
1. 在96孔板中接种细胞悬液(100uL/孔),通常细胞增殖实验每孔约2000个细胞,细胞毒性实验每孔约5000个细胞,具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等因素决定。
2. 按照实验需要,进行培养并给予0-10uL特定的药物刺激,处理一段适当的时间(例如:6,12,24或48小时)。
3. 每孔加入10uL CCK-8溶液。如果起始的培养体积为200uL,则需要加入20uL CCK-8溶液,以此类推。可以用加相应量细胞培养基和CCK-8但不加细胞的孔作为空白对照,若担心所使用的的药物会干扰检测,需设置加相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但不加细胞的孔作为空白对照。
4. 在细胞培养箱内继续孵育1-4小时,具体时间可以通过预实验确定。预实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测,然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续试验。
5. 用酶标仪测定在450nm处的吸光值,若无450nm滤光片,可以使用420-480nm的滤光片。如果样品为高浑浊度的细胞悬液,可以使用大于600nm的波长,例如650nm,作为参考波长进行双波长测定。
6. 如果需要暂时不测O.D值,可以向每孔中加入10uL 0.1M HCL溶液,或者1% w/v的SDS溶液,避光保存在室温,24小时内吸光度不会发生变化。
注意事项:
1. 使用96孔板进行检测时,如果细胞培养时间较长,请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。同事,可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。
2. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前。建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入CCK-8试剂后的培养时间。
3. 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀,建议铺板过程中注意时常混匀,防止因细胞沉淀造成不均匀。加入CCK-8后请前后左右轻轻摇动培养板数次,是培养基和CCK-8溶液充分混匀。
4. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应,如果待测物质有氧化性或还原性,可在加CCK-8之前更换新鲜培养基,去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
5. 加入CCK-8时,如果细胞培养时间较长,培养基颜色或pH值已变化,建议换用新鲜的培养基。
6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡,否则会干扰测定。
7. 本试剂盒系无菌罐装生产,在使用过程中,请在生物安全柜内无菌操作,避免污染。
8. 为了您的健康和安全,请穿戴实验服并佩戴一次性乳胶手套进行操作。
9. 本制品仅供科研使用,严禁用于临床诊断和药物等。
品牌: | 爱普科学 |
英文名称: | Cell Counting Kit(CCK-8) |
规格: | 100T/500T/2500T/10000T |
性状: | 液体 |
储存温度: | 2-8℃ |
保质期: | 两年 |
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