产品储存：室温运输和储存，保质期12个月。

储存事项：

1. 收到本试剂盒后请按照各组分标签储存条件尽快保存试剂盒内各组分。

2. RNase A保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输，收到后，不超过25°C室温至少保存6个月，4°C保存12个月，长期保存可存放在-20°C。

3. 第一次使用时，可将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg/mL)置于4°C保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量的RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

4. 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出，出现浑浊或者沉淀，可在37°C水浴中加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

5. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：

    本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

    本试剂盒提取的质粒纯度很高，并去除了大部分内毒素，除用于常规的PCR、酶切、转化等实验外，还可以直接用于原生质体转染等一般的转染实验。如果对于转染要求特别高的客户，需要提取的质粒内毒素含量极低的话，可以选择本款试剂盒的升级版本：PE303/AipFast Plus无内毒素高纯度快速质粒中提试剂盒(离心柱型)，升级版本(货号：PE303)配备了爱普科学独特的专用内毒素清除剂，提取的质粒内毒素含量极低(<0.1 EU/ug DNA)，当然，操作流程上也较本款试剂盒稍微复杂几步，客户可以根据自己具体的实验需求进行选择。

产品特点：

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好，克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2. 独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除，有效防止了质粒被核酸酶降解。

3. 操作安全，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

4. 快速便捷，从30-70mL大肠杆菌LB(Luria-Bertani)培养液中，可快速提取100-500µg纯净的高拷贝质粒DNA。

5. 获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

注意事项：

1. 所有的离心步骤如未加另外说明，均在室温完成，使用带15mL以上转头，且转速可以达到8,000×g(约9,000rpm)的台式离心机。

2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应适当加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、N3的用量，其它步骤相同。

3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/mL DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。

4. 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或者超螺旋状态的的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。

5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在－20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

关于平衡液的使用：

1. 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失即可。

2. 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取500μL的平衡液至柱子中。8,000×g(约9,000 rpm)离心1 min，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液WB和去蛋白液PE瓶中按照该组分标签上的指示，加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！将RNase A全部加入溶液P1中，混匀，每次使用后置于2-8℃保存。

1. 取30-50mL(最多不超过75mL)过夜培养的菌液加入50mL离心管，8,000×g(约9,000 rpm)，离心1 min，尽可能的倒干上清，收集菌体。

注：如使用15mL离心管，可以离心弃上清后，在同一个15mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。

2. 加2.3mL溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。

注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

3. 加2.3mL的溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，室温放置4-5min。

注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过 5min！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

4. 加2.3mL溶液N3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。8,000×g离心10 min，小心吸取上清至新管，避免吸取到漂浮的白色沉淀。

注：加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。

注：如有漂浮白色沉淀，可用吸头撇开浮沫伸入液面下吸取，偶然吸到少量漂浮的白色沉淀也不影响实验结果，后续过滤漂洗过程中都会去除。

5. 柱平衡：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取500μL的平衡液至柱子中。8,000×g(约9,000 rpm)离心1 min，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕，接后续的操作步骤。

注：平衡液可以增强硅胶膜的吸附核酸能力，请使用当天处理的吸附柱。

6. 向第4步得到的上清中加入0.5倍体积异丙醇(约3mL)后充分颠倒混匀后，分多次转移混合液至吸附柱MC中，8,000×g离心1 min，弃滤液。

注：个别情况下离心机转子倾角较大，建议每次加入吸附柱的溶液体积为3.5mL(不超过，以防产生漏液现象)。直到所有混合溶液通过此吸附柱。

7. 加入3mL去蛋白液PE(请先确认已加入无水乙醇!)，8,000×g离心1 min，弃滤液。

注：此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质，如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应加此步骤；如所用菌株为XL-1 Blue、Top10和DH5α等缺陷型菌株，核酸酶含量低，则可略过此步骤。

8. 加入3mL漂洗液WB(请先确认已加入无水乙醇!)，8,000×g离心1 min，弃滤液。再加入3mL漂洗液WB，重复漂洗一次，弃滤液。

9. 将空吸附柱放回收集管中，8,000×g离心3 min以干燥基质膜上残留乙醇。

注：该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并降低洗脱效率，降低质粒产量。

10. 将吸附柱置于新的15mL离心管中，室温晾干2-3 min，在吸附膜的中间部位加0.5mL (可在0.3mL-0.6mL变化)洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-75°C水浴中预热可提高产量)，室温放置3 min，8,000×g离心1 min，弃吸附柱，将提取的质粒DNA于-20℃保存。

注：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1 min，8,000×g离心1 min。洗脱两遍可提高浓度约10%左右。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于300μL，体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量。

产品说明书.pdf