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AIPzol 通用型总RNA快速提取试剂盒,免氯仿(离心柱型)

货号:RE206-01

品牌:爱普科学

货期:现货

价格:780

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储存温度:常温运输和储存,保质期12个月。

储存事项:

1. 本试剂盒常温运输和储存,12个月不影响使用质量。AIPzol建议收到产品后4℃避光保存,保质期2年不影响使用效果。

2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍:

1. 本试剂盒是普通柱式TRIzol法提取试剂盒的升级版,其中AIPzol组分是传统TRIzol 的免氯仿升级版,并配套了离心柱技术,经过多次漂洗去除各种杂质,简化了实验操作,并最大限度得到高纯度的RNA。可广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞、细菌等样品中提取Total RNA。

2. 本试剂盒中AIPzol组分与传统柱式试剂盒中TRIzol组分提取方法相比,本产品不需要使用氯仿进行分层,操作更简单便捷,且全程操作可在常温进行,同时AIPzol去除DNA能力比传统TRIzol更强大,提取得到的RNA纯度更高,基本无DNA残留污染。

3. 本试剂盒不需要DNA酶柱上消化,提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR检测、mRNA纯化、体外翻译、Northern Blotting杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。

产品特点:

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司的特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。

2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。

3. 独有的AIPzol配方,可以有效的消除基因组DNA污染。

4. 多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。

5. 有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了RNA纯度。

注意事项:

1. 第一次使用前请按照组分标签瓶提示,先在漂洗液RW瓶和去蛋白液PE瓶中加入指定量无水乙醇,加入后请及时打钩标记已加入无水乙醇,以免多次加入!

2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳,所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。

3. AIPzol和去蛋白液PE中含有刺激性有害化合物,操作时要配戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗

4. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~2Kb(28S),~1Kb(18S),条带亮度比值约为2 : 1。有时候也可以看到~0.1Kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。

5. 加入AIPzol匀浆后,加水离心前样品可在-60℃至-70℃保存一个月以上。

6. 若提取细菌样本RNA,推荐使用爱普科学的AipEasy Plus 细菌RNA快速提取试剂盒(目录号:RE261)。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项):

提示:第一次使用前请按照组分标签瓶提示,先在漂洗液RW瓶和去蛋白液PE瓶中加入指定量无水乙醇!

1. 样本处理

动物组织:

取新鲜或-70℃冻存动物组织尽量剪碎,每15-50mg组织样本加入0.5mL AIPzol,匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入0.5mL AIPzol,混匀。

植物组织:

取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在 AIPzol中迅速研磨,每25-50mg组织加入0.5mL AIPzol,混匀。

贴壁细胞:

尽量去除干净残留培养液后,直接往直径3.5cm的培养板中加入0.5mL AIPzol覆盖并反复吹打裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的AIPzol加入量(10cm20.5mL)。当AIPzol量不足时可导致抽提的RNA中污染含有DNA

注意:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶()脱落,但这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出全部RNA,实验继续做即可。

悬浮细胞:

离心收集细胞。在AIPzol试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每1-5×106的动物细胞、植物细胞或每5×106细菌加0.5mL AIPzol。在加入AIPzol前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些细菌可能需要使用匀浆器。

液体样本:

200μL(低于200μL时,可用RNase-free Water补足)血浆、血清等液体样本,加入0.5mL AIPzol后振荡混匀。

2. 向上述裂解液中加入2/5体积的RNase-free Water(每500μL AIPzol加200μL水),剧烈振荡混匀,室温静置5 min。

注意:当处理样本量较大50mg左右时,可延长室温静置时间到10-15 min。

3. 室温12,000rpm 离心15 min。

4. 离心后溶液分成上层水相(含RNA)和下层沉淀(含蛋白质、DNA、多糖等杂质),小心吸取上层水相至一个新的离心管中。

注意:上层水相约占总体积的90%,如用500μL AIPzol进行提取,上层水相约为630 μL,建议吸取500μL;提取微量样本时,为减少RNA损失,可以全部转移上清。

注意:当样本量较小时,离心后可能不会出现下层沉淀,属于正常现象,可继续按后续步骤完成提取。

5. 加入水相体积一半也就是0.5倍体积的无水乙醇,混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能的沉淀转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内,12,000rpm 离心30 sec,弃废液,将吸附柱重新套回收集管。

注意:吸附柱容积为750μL,若混合液超过该体积,请分多次进行上柱。请弃废液后将吸附柱放回收集管,继续转入剩余混合物到吸附柱RA中离心。

6. 加500μL去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30 sec,弃废液。

7. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30 sec,弃废液。

8. 重复步骤7一次。

9. 将吸附柱RA放回空收集管中,12,000rpm离心2 min,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 将吸附RA转移至一个新的1.5mL离心管中,向吸附柱膜中间部位悬空滴加40-60μL的RNase-free Water,静置1 min,12,000rpm 离心1 min。如果需要提高RNA产物浓度,可将RNase-free Water于90℃预热;也可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1 min进行洗脱。如果需要提高RNA产物获取量,可再加30μL RNase-free Water,离心1 min,合并两次洗脱液。

注:洗脱体积越大,洗脱效率越高,RNA产量越高,但是浓度将会降低。如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小洗脱体积建议最好不少于30μL,体积过小会降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。

品牌: 爱普科学
英文名称: AIPzol Universal Total RNA Rapid Extraction Kit(Centrifugal Column)
规格: 100T/200T
性状: 液体
储存温度: RT
保质期: 12个月
地址:北京市昌平区北清路1号珠江摩尔国际大厦5号楼2单元305
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