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储存事项:AipPure TRIzol LS Reagent在室温下能稳定保存12个月。尽管如此,为达到最佳效果,我们建议保存在2~8°C的环境下,2~8°C能稳定保存24个月。
重要提示:本品中含有苯酚,具有毒性和腐蚀性。如果吸入体内、接触皮肤、吞食等会导致中毒、灼伤以及其他身体伤害。使用本制品时应穿戴防护物品(如防护服装、手套、眼罩、面罩等)。如果不小心接触,应立即用大量的清水冲洗,严重的请立即前往医院治疗。
产品介绍:
1. TRIzol LS试剂是直接从来源于人、动植物、酵母、细菌和病毒的液体样品中提取总RNA的试剂。也可以从动物组织、 植物材料、 各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。 该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(5×106)以及大量的组织(≥1g)和细胞(>107)均有较好的分离效果。样品在TRIzol LS中被充分裂解的同时能够最大限度地保证RNA的完整性。在加入氯仿离心后,溶液会分成三层:上层无色水相、中间层和下层有机相,RNA 分布在上清层中。收集上清层后,经异丙醇沉淀便可以回收得到总RNA。提取的总RNA完整性好,无蛋白和DNA污染,可用于各种分子生物学常规实验,如RT-PCR、qRT-PCR、Northern-Blot、Dot-Blot、体外翻译等。
2. TRIzol LS试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7kb和15 kb之间不连续的高分子量条带(mRNA和hnRNA成分),两条优势核糖体~5 kb(28S)和~2 kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3 kb之间(tRNA,5S)。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8。
注:如果是普通琼脂糖凝胶电泳,28S的位置大约在2kb,18S大约在1kb的位置,不同浓度的凝胶位置变化较大。
注意事项:
1. 样品用TRIzol LS匀浆后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一个月以上。保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8°C可以保存一周,-20°C条件下可以保存1年。RNA半衰期比较短,容易降解,建议提取后尽快进行后续实验,如反转录成cDNA,Northern Blot等。
2. 若下游实验对DNA非常敏感,建议用 RNase-free DNase I(货号:M328)对RNA进行处理。
3. 自备试剂:氯仿、异丙醇(新开封或提取RNA专用)、75%乙醇(用DEPC处理过的水配制)、 RNase-free water或者DEPC处理过的水。
4. 本公司生产AipPure TRIzol LS Reagent质量优异,可以完美替代Invitrogen的TRIzol LS Reagent。提取质量和下游实验完全一样。
RNA抽提操作步骤(实验前请先阅读注意事项):
提示:用TRIzol LS抽提RNA时要戴手套和护眼罩。避免接触皮肤和衣服。在化学通风橱完成操作。避免呼吸道吸入。如无特殊说明,所有的操作应该在15~30°C的室温条件下。
1. 匀浆
1) 生物液体:每0.25mL液体样品(血清,血浆,脑脊液等等)加入0.75mL TRIzol LS,用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。每5~10×106个细胞至少加入0.75mL TRIzol LS。TRIzol LS 和液体样品的终体积比总是3:1。
2) 动物组织:用Glass或强力匀浆器搅匀组织样品,每50~100mg组织或者0.25mL组织悬液加0.75mL的TRIzol LS。一般50~100mg组织体积都要小于0.25mL,如果组织样品的体积小于0.25mL,加入灭菌水将组织样品体积调整到0.25mL以保证体积比例是3:1。
3) 单层生长细胞:直接往直径3.5 cm的培养板中加入0.3mL-0.4mL的TRIzol LS裂解细胞,用加样枪吹打帮助充分裂解细胞。依据培养板的面积而不是依据细胞的数量来决定所需的TRIzol LS量(每10cm2加0.3-0.4mL)。不需要往裂解物里面加水,因为培养板中附着残留的培养液已经充分稀释了TRIzol LS。
注:贴壁培养细胞往往不能完全从培养瓶(皿)脱落,这并不意味着裂解不完全,此时细胞膜实际已经完全破裂开,并已释放出RNA,继续做即可。
4) 细胞悬液:通过离心来沉淀细胞。在TRIzol LS试剂中用移液管反复吹打来裂解细胞。每5~10×106 的动物细胞,植物或酵母菌细胞或每1×107 细菌加0.75mL的TRIzol LS。和步骤b一样用灭菌水调节样品体积到0.25mL以保证体积比例是3:1。在加入TRIzol LS前应避免洗涤细胞,因为那样会增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和细菌可能需要使用匀浆器。
5) 植物组织:取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzol LS中迅速研磨,每50-100mg组织加入0.75mL TRIzol LS,和步骤b一样用灭菌水调节样品体积到0.25mL以保证体积比例是3:1,混匀。
2. 将匀浆样品剧烈震荡后在室温条件下放置5分钟以使核蛋白体完全解离。
3. 可选步骤: 在4°C的条件下以12,000 rpm的离心力离心10分钟,取上清。
注:如样品中含有较多蛋白质,脂肪,多糖或肌肉,植物的块茎结节等可离心去除。离心后的沉淀中包含有细胞外膜,多糖,以及高分子量DNA,上清中含有RNA。处理脂肪组织的样品时,上层是大量油脂应除去。取澄清的匀浆液进行下一步。
4. 每0.75mL TRIzol LS加0.2mL氯仿。盖紧管盖,剧烈震荡15秒并将其在室温下放置2~3分钟。
5. 在4°C 12,000 rpm的离心力高速冷冻离心10-15分钟。离心后混合物分成三层:下层有机苯酚氯仿层,中间层,上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIzol LS容量的70%。
注:有机层和中间层是蛋白和DNA,如果需要提取,请联系我们索取提取方法。
6. 将水样层转移到一干净的离心管中,加入等体积异丙醇,颠倒混匀后室温放置10分钟。
注:RNA沉淀在离心前通常不可见,离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
7. 在室温或者4°C 12,000 rpm 离心10分钟,弃上清。
8. 加入75%乙醇洗涤沉淀。每使用0.75mL TRIzol LS用1mL 75%乙醇对沉淀进行洗涤。
9. 在室温或者4°C 12,000 rpm离心3分钟,弃上清,注意不要丢失RNA沉淀。
注:剩余的少量液体可短暂离心,然后用枪头吸出,注意不要吸弃沉淀。
10. 室温放置2-3分钟,晾干。加入30-100μL RNase-free水,充分溶解RNA,得到的RNA保存在-70℃,防止降解。
注:沉淀不要过分干燥,以免难于溶解。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | AipPure TRIzol LS Total RNA Extraction Reagent(Liquid Sample) |
规格: | 100mL |
性状: | 液体 |
储存温度: | 2-8℃ |
保质期: | 两年 |
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