适用范围：适用于琼脂糖凝胶DNA回收。

产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。储存于低温(4℃或-20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15-25℃)进行。

产品介绍：试剂盒为琼脂糖凝胶DNA纯化回收的专用试剂盒，适用于琼脂糖凝胶DNA的纯化回收。本试剂盒的原理是在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于离心柱内的硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗－离心等步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1. 操作简单，快速便捷，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

2. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

3. 使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。

4. 溶胶液加酚红调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，极大的提高回收效率。改进的溶胶液配方，极大的提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到12,000rpm的传统台式离心机。

2. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

4. 溶胶液中含有刺激性化合物，操作时请穿实验服并佩戴一次性乳胶手套，实验操作中应避免避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. 回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率迅速降低。回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-15μg，100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达85％。

6. 切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。

7. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应该保存在-20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

关于平衡液的使用：

1. 介绍：核酸吸附硅胶膜柱子长期放置过程中会同空气中的电荷/尘埃发生反应而影响其核酸的结合能力。硅胶柱经平衡液预处理后可大大减少柱子中硅胶膜的憎水基团，提高核酸的结合能力。从而提高硅胶柱子回收效率或者产量。平衡液是强碱性溶液，若不小心碰到，请用大量自来水清洗。用完后需盖紧瓶盖，以免接触空气。室温保存。在保存过程中可能有沉淀生成，请加热至37℃使沉淀完全消失。

2. 使用方法：取一个新的硅胶膜吸附柱子装在收集管中，吸取100μL的平衡液至柱子中。12,000rpm离心1分钟，倒掉收集管中废液，将吸附柱子重新放回收集管。此时平衡液预处理柱子完毕。接后续的操作步骤。

操作步骤：

提示：第一次使用前请先在漂洗液WB瓶中按照该组分标签上的指示，加入指定量无水乙醇！并打钩做好标记避免重复加入！

1. 在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA的凝胶，得到凝胶体积越小越好。

2. 将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5mL离心管，称重。

注：先称一个空1.5mL离心管重量，然后放入凝胶块后再称一次，两次重量相减，得到凝胶的重量。

3. 加3倍体积溶胶液DD。

注：如果凝胶重为100mg，其体积可视为100μL，则加入300μL溶胶液。

注：如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液。

4. 56℃水浴放置10分钟(或直至胶完全溶解)。每2-3分钟涡旋震荡一次帮助加速溶解。

5. 可选步骤(一般不需要)：每100mg最初的凝胶重量加入150μL的异丙醇，震荡混匀。

注：有时候加入异丙醇可以提高回收率，加入后不要离心。回收大于4Kb的片段时，不加入异丙醇，加入有时反而可能降低回收效率。

平衡液预处理吸附柱：使用平衡液预处理硅胶膜吸附柱为必做步骤，具体方法参见前文“关于平衡液的使用”

6. 将上一步所得溶液加入吸附柱EC中(吸附柱放入收集管中)，室温放置1分钟，12,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

注：如果总体积超过750μL，可分两次将溶液加入同一个吸附柱EC中。

注：过滤下的溶胶液和收集管内残存的强碱性平衡液混合后，溶胶液可能会从黄色变成橘红甚至紫色，此为酚红PH指示剂碱性条件下的正常颜色变化。

7. 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

8. 重复操作步骤7一遍。

9. 将吸附柱EC放回空收集管中，12,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 取出吸附柱EC，放入一个新的无酶离心管中，在吸附膜的中间部位加入30-50μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中加热效果更好)，室温放置2分钟，12,000rpm 离心1分钟。收集得到的DNA。DNA可以存放在-20℃，如果要长时间存放，可以放置在-70℃保存。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要较多量DNA，可将第一次得到的洗脱液重新加入吸附柱中，重新洗脱一遍。如果需要DNA浓度较高，可适当减少洗脱体积，但是最小体积不应少于25μL，体积过小降低DNA洗脱效率，减少产量。

产品说明书.pdf