适用范围：适用于快速提取微量动物细胞、微切割组织和易裂解动物组织等样品总RNA，使用独有基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，不需要使用DNase消化，RNA可直接用于PCR，荧光定量PCR。

产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。Poly Carrier常温运输，4℃可存放一个月，置于-20℃长期保存。

储存事项：

1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

2. 不合适的储存于低温(4℃或者－20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15℃－25℃)进行。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：本公司独家推出AipEasy无苯酚、氯仿RNA快速提取技术基础上，又独家研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解微量样品的细胞和灭活细胞RNA酶，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于特制离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-free Water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1. 完全不使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 快速简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3. 独家研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。

4. 多次柱漂洗确保高纯度，OD₂₆₀/OD₂₈₀典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留，可用于RT-PCR、Northern-blot等实验。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。

2. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。例如：细胞处理量不超过5x105，组织不超过5mg。

3. 一般本试剂盒最小处理量可以处理10个以上的组织细胞。

4. 裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

5. Poly Carrier使用方法：如果起始处理量很少，我们推荐使用Poly Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。使用时在每个样品提取所需裂解液RLT Plus中加入4μL Poly Carrier，将裂解液RLT Plus与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可。也可根据样品数量，在总共需要的裂解液RLT Plus中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

6. 预防RNase污染，应注意以下几方面：

1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

2) 使用RNase-free的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3) RNA在裂解液RLT Plus中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用RNase-free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4) 配制溶液应使用RNase-free的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。)

7. 关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase消化也无法做到100%无残留)，本公司的AipEasy RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1) 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。

2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I处理以提高效果。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(Clean up)，请联系我们索取具体操作说明书。

4) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。请联系我们索取具体操作说明书。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇！如果处理的细胞量小于5000个或者处理组织量小于10μg时，匀浆前请在裂解液中加入4μL Poly Carrier(按照注意事项5指示)

1. 组织培养细胞

1) 收集<5x10⁵悬浮细胞到一个1.5mL离心管，对于贴壁细胞，孔板培养可以直接裂解，细胞瓶培养应该先用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

2) 13,000rpm离心10秒(或者300xg离心5分钟)，使细胞沉淀下来。完全吸弃上清，留下细胞团，注意不完全弃上清会稀释裂解液导致产量纯度降低。

3) 轻弹管壁将细胞沉淀完全松散重悬，加350μL(<5x10⁵细胞)裂解液RLT Plus，吹打混匀后用手剧烈振荡20秒充分裂解。

4) 匀浆：(处理细胞量极少时<1x10⁵一般不需要，涡旋振荡一分钟匀浆)。用带钝针头的一次性1mL(配0.9mm针头)注射器抽打裂解物5-10次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高产量。

5) 将裂解混合物或匀浆混合物全部加到DNA清除柱上(清除柱放在收集管内)。

6) 接操作步骤项下3。

2. 动物组织(例如鼠肝脑)

1) 电动匀浆：<5mg组织加入350μL裂解液RLT Plus后电动彻底匀浆20-40秒。

2) 研磨杵+匀浆：1.5mL离心管内，加入100μL裂解液RLT Plus，加入<5mg组织立刻用微量研磨杵研磨匀浆完全。补足裂解液RLT Plus到350μL。用带钝针头的一次性1mL(配0.9mm针头)注射器抽打裂解物10次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度防堵塞柱子和提高产量。

3) 液氮研磨+匀浆：在液氮中研磨组织成细粉后，取适量组织细粉(<5mg)转入装有350μL组织裂解液RLT Plus的1.5mL离心管中，用手剧烈振荡20秒，充分裂解。用带钝针头的一次性1mL(配0.9mm针头)注射器抽打裂解物10次或直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，防堵塞柱子和提高产量。

4) 将匀浆后裂解物13,000rpm离心3分钟，沉淀可能存在的裂解困难的碎片或者不溶物，将裂解物上清全部加到DNA清除柱上(清除柱放在收集管内)。

5) 接操作步骤项下3。

3. 13,000rpm 离心30秒，保留滤过液(RNA在滤过液中)。

4. 用微量移液器较精确估计滤过液体积(通常为350μL，滤过时候损失体积应该减去)，加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

5. 立刻将混合物(每次小于700μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心30秒，弃掉废液。

6. 加入700μL去蛋白液RW1，室温放置1分钟，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

7. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μL漂洗液RW，重复一遍。

8. 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm 离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

9. 取出吸附柱RA，放入一个RNase-free离心管中，在吸附膜的中间部位加15-20μL RNase-free Water(事先在70-90℃水浴中加热可提高产量)，室温放置1分钟，12,000rpm 离心1分钟。

注：减少洗脱体积可以提高RNA浓度，但是RNA产量会降低，用户根据需要选择。

产品说明书.pdf