适用范围：适用于快速提取动物细胞、微切割组织和易裂解动物组织等样品的微量总RNA。

产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。Poly Carrier常温运输，4℃可存放一个月，置于-20℃长期保存。常温组分储存于低温(4℃或-20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15-25℃)进行。

产品介绍：

    本试剂盒在爱普科学独家推出AipEasy系列无苯酚、氯仿RNA快速提取技术基础上，又独家研发成功基因组DNA清除柱技术，确保高效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，，即可获得高纯度、高完整性的RNA。

    本试剂盒采用爱普科学独特的裂解液，可迅速裂解微量样品的细胞和灭活细胞RNA酶，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除的同时，而RNA被有效穿透滤过，滤过的RNA用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于特制离心柱内硅基质膜上，再通过一系列快速的漂洗/离心等步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-free Water将纯净的RNA从硅基质膜上洗脱。得到的高纯度RNA可直接用于反转录PCR、荧光定量PCR和Northern-Blot等下游相关分子生物学实验。

产品特点：

1. 操作安全，完全不使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 操作简单，快速便捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

3. 爱普科学独家研发的基因组DNA清除柱技术，确保高效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，基本无DNA残留。

4. 多次柱漂洗确保高纯度，得到的RNA纯度高、完整性好，OD260/OD280典型的比值可达2.0～2.2(100%纯的RNA比值一般在2.2左右，很多公司的产品因为残留蛋白或DNA较多，造成比值降低，无法达到2.2这个纯度标准，因此降低要求1.9-2.0就凑合使用了，但是爱普科学的产品标准一般可达到高水准的2.1-2.2的纯度标准)。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。

2. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

4. 样品处理量绝对不要超过基因组吸附柱DA和和RNA吸附柱RA处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。例如：细胞处理量不超过5x10⁵，组织不超过5mg。

5. 一般本试剂盒最小处理量可以处理10个以上的组织细胞。

6. 裂解液RLT Plus和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时请穿实验服并佩戴一次性乳胶手套，实验操作中应避免避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。

7. Poly Carrier使用方法：如果起始处理量很少，我们推荐使用Poly Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入Poly Carrier。使用时在每个样品提取所需裂解液RLT Plus中加入4μL Poly Carrier，将裂解液RLT Plus与Poly Carrier溶液充分颠倒混匀即可。也可根据样品数量，在总共需要的裂解液RLT Plus中加入总共需要的Poly Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

8. 预防RNase污染，应注意以下几方面：

1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

2) 使用RNase-free的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3) RNA在裂解液RLT Plus中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用RNase-free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4) 配制溶液应使用RNase-free的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。)

9. 关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留(DNase消化也无法做到100%无残留)，本公司的AipEasy系列RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA清除柱技术，绝大多数DNA已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1) 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。

2) 选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。

3) 将RNA提取物用RNase-free的DNase I处理以提高效果。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(Clean up)，请联系我们索取具体操作说明书。

4) 在操作步骤的去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I处理。如需要请联系我们索取具体操作说明书(爱普科学DNA酶柱上消化试剂盒货号：RE280)。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：首次使用前请先在漂洗液RW和70%乙醇瓶中按照该组分标签上的指示，加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在标签上标记已加入乙醇，以免多次加入！如果处理的细胞量小于5000个或者处理组织量小于10μg时，匀浆前请在裂解液中加入4μL Poly Carrier(按照注意事项7指示进行操作)

1. 样本处理

2. 13,000rpm 离心30秒，保留滤过液(RNA在滤过液中)。

3. 用微量移液器较精确估计滤过液体积(通常为350μL，滤过时候损失体积应该减去)，加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

4. 立刻将混合物(每次小于700μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中(吸附柱放入收集管中)，13,000rpm离心30秒，弃掉废液。

5. 加入700μL去蛋白液RW1，室温放置1分钟，13,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

6. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，13,000rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μL漂洗液RW，重复一遍，弃掉废液。

7. 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm 离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

8. 取出吸附柱RA，放入一个新的RNase-free离心管中，根据RNA的预期产量在吸附膜的中间部位加入15-20μL RNase-free Water(事先在70-90℃水浴中加热可提高产量)，室温放置1分钟，13,000rpm 离心1分钟，洗脱RNA。提取的高纯度RNA可直接用于下游相关实验或储存于-85℃至-65℃保存。

注：可重新加入15-20μL RNase-free Water重复操作步骤8一遍，合并两次洗脱液(如果需要RNA产量高)；或者使用第一次的洗脱液重新加回到吸附柱内，重新洗脱一遍(如果需要RNA浓度高)。用户根据具体实验需要自行选择。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高，RNA产量越高，但是浓度将会降低。如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小洗脱体积建议最好不少于15μL，体积过小会降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。

产品说明书.pdf