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产品储存:常温或者2-8℃避光干燥可保存12个月。
制品说明:本品用DMSO溶解,因DMSO的熔点是18.5℃,使用前请放置到室温充分溶解。
SYBR Green I 核酸染料特点:
● 安全无毒:属花箐类染料,容易生物降解,无致癌毒性。
● 灵敏度高:至少可检出20pg DNA,高于EB染色法25~100倍。
● 信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低。
● 操作简单:无须脱色或冲洗,即可直接用紫外凝胶透射仪或可见光透射仪观察。
● 适用范围广:可适用于多种凝胶电泳方法:琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电场凝胶电泳和毛细管电泳等。
● 使用方便:对分子生物学中常用的酶(如:Taq酶、反转录酶、内切酶、T4连接酶等)没有抑制作用。
● 经济实惠:价格比银染便宜。
SYBR Green I 使用方法简介:
1. 胶染法(用法同EB,推荐方法,见图1)
1) 制胶时加入SYBR Green I 核酸染料。冷却胶至50℃左右,每100mL胶中加入3~5μL SYBR Green I 核酸染料。
2) 按照常规方法进行电泳即可。
注:此方法染色可以准确确定核酸片段分子量,染料用量相对较少。1mL染料大约可以做300块 100mL的胶。
2. 点染法(见图3)
1) 该方法适于琼脂糖凝胶电泳和PAGE凝胶电泳。
2) 工作液的配制:用电泳缓冲液将10000×的SYBR Green I 稀释100倍,即为SYBR Green I 工作液。SYBR Green I 工作液可以置2~8℃保存一个月以上。
3) 制胶:按常规方法制胶,不含任何染料。
4) 样品染色:向分析样品中加入SYBR Green I 工作液和载样缓冲液,室温放置10分钟,使SYBR Green I 与样品中DNA充分结合。SYBR Green I 工作液加入量为总上样量的1/5~1/10。
5) DNA Marker染色:将5μL DNA Marker、5μL DNA Marker稀释液和1μL SYBR Green I 工作液混匀,室温放置5分钟,使SYBR Green I 与DNA充分结合。
6) 上样及电泳:按常规操作。
注:用点染法染色时,灵敏度最高,染料用量最少。但大片段稍有滞后现象,如果需要更准确确定分子量(与Marker对比),建议使用胶染法。
3. 泡染法
1) 按照常规方法进行电泳。
2) 用pH 7.0~8.5 的缓冲液(如:TAE,TBE 或 TE),按照10000﹕1的比例稀释SYBR Green I 浓缩液,混匀,制成染色溶液。
3) 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放入凝胶,用铝箔等盖住容器使染料避光。室温振荡染色10~30分钟,染色时间因凝胶浓度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝胶直接在玻璃平皿上染色,将配好的稀释溶液轻轻地倒在胶板上,让稀释液均匀地覆盖整个胶板,并染色30分钟。玻璃平皿必须预先经过硅烷化溶液处理(避免染料吸附在玻璃表面上)。
注:用泡染法染色时,可以精确确定核酸片段分子量。但染料用量是三种方法中最多的。
4. 点染+胶染法(见图2)
此法结合方法1和方法2,灵敏度最高,对于低浓度样本比EB检测更灵敏。
几种染色方法特点比较(Super Green I 为Sybr green I 的推广名)
染色方法 | 灵敏度 | 染料用量 | 确定片段分子量精确度 |
胶染法(推荐方法) | 较高 | 较少 | 较高 |
点染法 | 很高 | 最少 | 大片段稍有滞后 |
泡染法 | 较高 | 最多 | 最高 |
点染+胶染法 | 最高 | 较多 | 大片段稍有滞后 |
注意事项:
1. 在SYBR Green I点染法中,电泳时间不要超过2小时,否则SYBR Green I会从DNA上分离出来,会产生弥散状条带。
2. 用点染方法染色时,条带稍有滞后现象,如果需要确定片段精确分子量(与Marker对比),建议使用胶染法(方法1)。
3. 在常规用酒精沉淀核酸的过程中,SYBR Green I可以全部从双链核酸上去掉。
4. 如果想对用SYBR Green I 染过的胶进行 Southern blots,建议在预杂化和杂化溶液中加入 0.1%~0.3% 的SDS。
5. 在紫外照射透视下,与双链 DNA 接合的 SYBR Green I呈现绿色荧光。如果胶中含有单链 DNA 则颜色为橘黄而不是绿色。
6. SYBR Green I对玻璃和非聚丙烯材料具有一定亲合力。建议在稀释、贮存、染色等使用过程中用聚丙烯类容器。
7. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
8. 本产品仅供科研用途,不用于临床诊断。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | SYBR Green I Nucleic Acid Gel Stain((10000×) |
规格: | 50uL/5*50uL |
性状: | 液体 |
储存温度: | -20℃ |
保质期: | 12个月 |
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