适用范围：适用于从血浆、血清、尿液或者其它无细胞体液中提取游离循环DNA/RNA和病毒核酸DNA/RNA。

产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。不合适的储存于低温(4℃或-20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15-25℃)进行。蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中，常温运输。收到后，不超过20℃室温至少保存6个月，4℃保存12个月，-20℃保存2年。

产品介绍：本试剂盒适用于从新鲜或冷冻(冰冻后没有解冻过，冻融会影响质量)的血浆、血清、尿液等无细胞体液中提取游离循环核酸(DNA/RNA)。爱普科学针对游离循环核酸片段小和含量低的特点，精心研发了独特的缓冲液系统，确保高效提取游离循环核酸(DNA/RNA)。纯化的游离循环核酸产量高、完整性好，最大限度的去除了蛋白、色素、脂类及其他抑制物。本试剂盒可处理0.1-1mL的液体样本，配置的高效微量吸附柱洗脱体积可低至20uL。游离核酸含量极低(典型浓度1-100ng/mL血浆)，纯化得率与样本的类型、储存条件、时间以及个体间差异有很大关系。本试剂盒纯化得到的游离DNA 质量稳定可靠、纯度高，可直接用于PCR、荧光定量PCR、酶切和二代测序等相关分子生物学实验。

产品特点：

1. 操作安全，完全不使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 操作简单，快速便捷，单个样品操作一般可在50分钟内完成。

3. 针对游离循环核酸片段小和含量低的特点，精心研发了独特的缓冲液系统，确保高效提取游离循环核酸(DNA/RNA)。

4. 多次柱漂洗确保高纯度，纯化的游离核酸质量稳定可靠、产量高、完整性好，用于下游相关实验表现效果更佳。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm 的传统台式离心机。

2. 需要自备乙醇，异丙醇。

3. 实验开始前请将水浴锅预热至60℃。

4. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

5. 样品冰冻保存后直到提取前应避免解冻，如果确实无法避免，应避免多次反复冻融，否则会导致提取量下降。

6. 建议处理前4℃以16,000xg 离心5-10分钟，可以进一步去除细胞碎片，减少来自于受损血细胞的gDNA和RNA的污染。冰冻后如果出现微小蛋白沉淀的情况下，也建议4℃以16,000xg 离心5分钟。

7. 预防RNase污染，应注意以下几方面：

1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。

2) 使用RNase-free的塑料制品和枪头避免交叉污染。

3) RNA在裂解液中时不会被RNase降解，但提取后继续处理过程中应使用RNase-free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。

4) 配制溶液应使用RNase-free的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%(v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌)

8. 本试剂盒可以提取0.1-1mL液体样品。如果处理样品为尿液，需要联系爱普科学(www.ipresci.com)或相关业务人员单独订购溶液ATL。尿液样本的操作步骤请参考说明书后面的附录二。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液RW和去蛋白液PE瓶中按照该组分标签上的指示，加入指定量无水乙醇，和溶液ACB瓶中按照该组分标签上的指示，加入指定量异丙醇，充分混匀后请及时在标签上标记，以免多次加入！

1. 向1.5mL离心管中加入20uL Proteinase K。

注：如果起始处理量超过300uL体积的样本，需选择更大容积的适合离心管。

2. 加入200uL血清/血浆样本。

注：当样品量超过200uL时，请按比例增加溶液ACL、溶液ACB和Proteinase K试剂用量，具体试剂加入量可参考说明书后面的附录一。

3. 加入160uL溶液ACL，混匀，涡旋震荡至少30秒。

4. 60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。

注：200uL血清/血浆样本60℃孵育10-15分钟即可。

5. 加入360uL溶液ACB(使用前检查是否加入异丙醇)，涡旋震荡15-30秒混匀。

6. 冰浴5分钟，短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。

7. 立刻将混合物(每次小于750uL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中(吸附柱放入收集管中)，13,000rpm 离心1分钟，弃废液。

8. 加入500uL去蛋白液RE，13,000rpm 离心30秒，弃废液。

9. 加入750uL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，13,000rpm 离心30秒，弃废液。

10. 加入750uL无水乙醇，13,000rpm 离心30秒，弃废液。

11. 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000rpm 离心2分钟，尽量除去乙醇，以免残留乙醇抑制下游反应。

12. 取出吸附柱RA，放入一个新的无酶的1.5mL离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加入20-50uL RNase-free Water(事先在70-90℃水浴中加热可提高产量)，室温放置2分钟，13,000rpm 离心1分钟，洗脱核酸。提取的高纯度DNA/RNA可直接用于下游相关实验或储存于-85℃至-65℃保存。

注：可重新加入20-50uL RNase-free Water重复操作步骤12一遍，合并两次洗脱液(如果需要核酸产量高)；或者使用第一次的洗脱液重新加回到吸附柱内，重新洗脱一遍(如果需要核酸浓度高)。用户根据具体实验需要自行选择。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高，核酸产量越高，但是浓度将会降低。如果需要核酸浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小洗脱体积建议最好不少于20uL，体积过小会降低核酸洗脱效率，减少核酸产量。

注：如果提取的游离DNA，可以用灭菌TE缓冲液洗脱，对于长期保存效果更好。

附录一：不同血浆/血清样品量推荐的试剂加入量

附录二：从尿液样品中提取游离循环核酸(DNA/RNA)

1. 向5mL离心管中加入63uL Proteinase K。

2. 加入500uL尿液样本。

注：当样品量超过500uL时，请按比例增加溶液ACL、溶液ACB和Proteinase K试剂用量。

3. 加入500uL溶液ACL和125uL溶液ATL，混匀，涡旋震荡混匀至少30秒。

注：溶液ATL最后加入，确保充分涡旋混匀。混匀时可能有沉淀产生，为正常现象，后续加热步骤会溶解，不影响产量。

4. 60℃孵育30分钟，其间颠倒混匀数次。

5. 加入1.8mL溶液ACB(使用前检查是否加入异丙醇!)，涡旋震荡15-30秒混匀。

6. 冰浴5分钟，短暂离心，使管壁和壁盖上的液体集中到管底。

7. 接操作步骤7完成后续实验。

产品说明书.pdf