1. 裂解液是否还需要加入蛋白酶及磷酸酶抑制剂？
● 对于这些裂解液是否需要添加适当的蛋白酶和磷酸酶抑制剂的问题，除了不含抑制剂的裂解液需要根据特定使用目的酌情考虑外，其余的裂解液在常规操作时，我们推荐添加PMSF，该抑制剂比较廉价但会进一步改善蛋白酶的抑制效果；如果样品非常宝贵希望非常高效地保证裂解样品的质量，推荐添加蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物，确保蛋白不被降解，蛋白磷酸化水平也能被保留；如果不涉及磷酸化蛋白，可以仅添加蛋白酶抑制剂混合物；从成本角度考虑，如果添加PMSF后蛋白降解的问题能被有效控制，但蛋白磷酸化水平不太稳定，可以考虑同时再添加磷酸酶抑制剂混合物。
2. PMSF的加入量？
● PMSF的终浓度要求是1mM进行添加。
3. 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒是否适用于冻存样品？
● 最好使用新鲜的样品，冻融过程细胞会损伤，导致核蛋白与胞浆蛋白的相互污染。
4. 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂盒提取核蛋白及浆蛋白的纯度怎么样？
● 试剂盒或类似试剂盒不可能实现细胞核蛋白和细胞浆蛋白的完全分离，相互之间的污染肯定是会存在的。如果是培养的细胞样品，则分离效果通常会好一些，如果是组织样品，则效果通常会相对差一些。如果是冻存的样品，则效果会很差，因为冻融过程会导致细胞浆蛋白和细胞核蛋白的混合。
● 如果希望获得更好的分离效果，在抽提细胞浆蛋白时，可以适当减轻剧烈漩涡震荡的程度，并注意漩涡振荡的时间不要过长，后续的离心时间可以长一些。并且特别注意吸取上清时千万不要触及沉淀。可以留一小部分液体不吸。确保吸出的细胞浆蛋白尽量少污染细胞核蛋白。后续抽提细胞核蛋白前，尽量先吸尽残余液体。如果对细胞核蛋白的纯度要求很高，可以加入100-200微升PBS，稍洗涤一下，随后12000-16000g离心5-10分钟，随后吸尽液体。PBS洗涤是为了充分去除残留的细胞浆蛋白。随后按照试剂盒说明书操作即可。核蛋白及浆蛋白的纯度鉴定可以使用相对应的内参蛋白进行Western检测。