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使用范围:适用于快速提取各种海洋动物组织基因组DNA。
产品储存:本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1. 结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀,可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解,恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。
2. 蛋白酶K保存在即用型甘油缓冲液中,常温运输。收到后,不超过25℃室温至少保存6个月,4℃保存12个月,-20℃保存2年。
3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶,然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除, 最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项:洗脱液EB不含有螯合剂EDTA,不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱,但应该确保批pH大于7.5,pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在-20℃。DNA如果需要长期保存,可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl,1mM EDTA,pH 8.0),但是EDTA可能影响下游酶切反应,使用时可以适当稀释。
操作步骤(实验前请先阅读注意事项):
提示:第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇,充分混匀,加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
1. 切取不多于30mg的组织材料,放入装有180μL组织裂解液SL的1.5mL离心管中,涡旋振荡15秒。
注:根据提取的组织不同,起始量也稍有不同,腮的细胞量较大,一般建议提取量不超过20mg。如果裂解困难,可先用液氮研磨。
2. 加入20μL的蛋白酶K溶液(20mg/mL),立刻涡旋振荡充分混匀。将裂解物放置在55℃水浴1-3小时或者直到组织消化完全。
注:不同组织裂解时间不同,通常需0.5–2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全,虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次,每次振荡混匀15秒。
可选做步骤:如果RNA残留较多,需要去除RNA,可在完成步骤2后加20μL RNase A(25mg/mL)溶液,振荡混匀,室温放置5-10分钟。
3. 加入200μL结合液CB,立刻涡旋振荡充分混匀,70℃放置10分钟。
4. 冷却后加100μL异丙醇,充分颠倒或涡旋振荡充分混匀,此时可能出现絮状沉淀。
5. 将上一步混合物和可能的沉淀都加入一个吸附柱AC中,(吸附柱放入收集管中)13,000rpm离心60秒,倒掉收集管中的废液。
注:如果有不溶组织物可能堵住枪头,可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物;如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去,该做法是为了去除不溶物,以免堵塞离心柱。
注:上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要,混匀不充分严重降低产量,必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。
6. 加入500μL抑制物去除液IR,12,000rpm 离心30秒,弃废液。
7. 加入600μL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
8. 加入600μL漂洗液WB,12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。
9. 将吸附柱AC放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 取出吸附柱AC,放入一个干净的离心管中,在吸附膜的中间部位加100μL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好),室温放置3-5分钟,12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,室温放置2分钟,12,000rpm离心1分钟。
注:洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要DNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积不应少于50μL,体积过小降低DNA洗脱效率,减少DNA产量。
11. DNA可以存放在2-8℃,如果要长时间存放,可以放置在-20℃。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | AipBest Marine Animal Tissue Genomic DNA Rapid Extraction Kit,With Protease K(Centrifugal Column) |
规格: | 50T/100T/200T |
性状: | 液体 |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
产品说明: | 收到产品后,请尽快按照试剂盒内各组分的储存温度保存! |
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