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AipPure 血清/血浆miRNA提取试剂盒(离心柱型)

货号:MR202-01

品牌:爱普科学

货期:现货

价格:1800

50T
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适用范围:适用于从动物及人体血浆和血清中纯化包括miRNA的无细胞总RNA

产品储存:本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。不合适的储存于低温(4℃或者-20℃)会造成溶液沉淀,影响使用效果,因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。

产品介绍:近年来对RNA干扰和调节性小RNA的广泛研究迫切需要一种能有效提取15­-30核苷酸左右大小RNA(包括siRNA和miRNA)的试剂盒。但是传统的RNA提取方法如硅胶膜不能有效吸附回收,酚/胍抽提和异丙醇或者乙醇沉淀并不能有效沉淀回收微小分子RNA,对于血清血浆样本更是由于其自身特点更难提取。本试剂盒采用独特的裂解液迅速直接裂解血清血浆RNA酶,强烈有机抽提去除蛋白和DNA,RNA包括微小分子RNA在高浓度乙醇下吸附于离心柱内特殊硅基质膜,再通过一系列特殊漂洗液快速的漂洗-离心的步骤,漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质进一步去除,最后低盐的洗脱液将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点:

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端

2. 也不需要异丙醇或者乙醇沉淀等容易丧失微小分子RNA的步骤

3. 特殊的裂解液配方,可以处理更多的血清/血浆样品

4. 多次柱漂洗确保高纯度,可用于RNAi、RT-PCR和Northern-blot等实验

注意事项:

1. 第一次使用前请先在Wash Solution 1瓶和Wash Solution 2/3瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入。Wash Solution 2/3可能加入乙醇使用几天后出现沉淀晶体,并不影响使用,直接不吸晶体,吸上清使用即可。

2. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子密封保存。

4. 除说明外,所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机。

5. 需要自备乙醇、氯仿、一次性注射器和研钵等。

6. Lysis Buffer 和Wash Solution 1含有刺激性化合物,操作时需穿防护服并佩戴一次性手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。

7. 预防RNase污染及实验前的准备:经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase污染。使用RNase-free的塑料制品和枪头避免交叉污染。RNA提取过程中应使用RNase-free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4小时,塑料器皿可在0.5M NaOH 中浸泡10分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。配制溶液应使用RNase-free的水或DEPC水(DEPC水的制备:将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC至终浓度0.1%(v/v),37℃放置过夜,高压灭菌)。

8. RNA纯度及浓度检测:一般情况下通过测量OD260值可以知道RNA产量,测量OD260/OD280比值可以是衡量蛋白质污染程度的指标之一,但是由于血清/血浆的RNA含量特别低,已经低于分光光度计测量的下限,无法测量准确,因此一般无法通过测量OD值或者比值的方法来判断纯度或者浓度,只能通过下游做荧光定量RT-PCR来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的RNA主要是小于100 nt的小RNA,因此传统的电泳检测RNA完整性并不适用于血清/血浆RNA。

操作步骤(取包含microRNA的总RNA):

提示:第一次使用前请先在Wash Solution 1和Wash Solution 2/3瓶中按照标签提示加入指定量乙醇!并打钩做好标记避免重复加入!

1. 每250μL样品(血清、血浆)加入750μL Lysis Buffer,涡旋振荡或者用加样枪吹打液体样品几次混匀帮助充分裂解。

注:对于含有高污染物样品如高蛋白高血脂样品,可以适当减少处理量,不足的体积,可以用去RNase-free Water补足。Lysis Buffer和液体样品的终体积比总是3:1(例如200μL样品+50μL RNase-free Water+750μL Lysis Buffer)。

2. 将样品剧烈震荡混匀,在15-30°C条件下孵育5分钟。

3. 每750μL Lysis Buffer加200μL氯仿,剧烈振荡15秒并室温下放置2分钟。

4. 4℃ 12,000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相(RNA/microRNA存在于水相中)。水相层的容量大约为所加Lysis Buffer体积的70%左右。

5. 小心取上清(精确计算体积)转入到新的离心管,加入1.5倍体积的无水乙醇(必须是室温!),涡旋混匀。此时可能出现沉淀,但是不影响提取过程,立即吹打混匀,不要离心,立刻接下步。

6. 将混合物(每次小于700μL,多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中,(吸附柱放入收集管中)12,000rpm离心30-60秒,弃掉废液。

7. 加入700μL Wash Solution 1(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。

8. 加入500μL Wash Solution 2/3(请先检查是否已加入无水乙醇!),12,000rpm 离心30秒,弃掉废液。加入500μL Wash Solution 2/3,重复操作一遍。

9. 将吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10. 取出吸附柱RA,放入新的RNase-free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-40μL RNase-free Water(事先在100℃水浴中预热效果更好),室温放置1分钟,12,000rpm 离心1分钟,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

注:如果预期RNA产量>30μg,加30-50μL RNase-free Water重复步骤10操作,合并两次洗脱液;如果需要RNA浓度高,可使用第一次的洗脱液重新加回到吸附柱重复步骤操作10。洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高,分两次洗脱合并洗脱液的RNA产量高,比前者高15–30%,但是浓度要低,用户根据实验需要自行选择。

品牌: 爱普科学
英文名称: AipPure Serum/Plasma miRNA Extraction Kit(Centrifugal Column)
规格: 50T
性状: 液体
储存温度: RT
保质期: 12个月
产品说明: 收到产品后,请尽快按照试剂盒内各组分的储存温度保存!
地址:北京市昌平区北清路1号珠江摩尔国际大厦5号楼2单元305
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