适用范围：适用于富含多糖、多酚植物总RNA抽提。

产品储存：室温运输，4℃保存，有效期12个月。

产品介绍：AipEasy试剂可从植物组织，特别是富含多酚或淀粉的植物组织中(如马铃薯块茎、白松松针或嫩苗、西红柿叶等)，提取高纯度的总RNA。每100mL可处理100mg组织200次，处理5g组织4次。

操作方法：

准备试剂：液氮，研钵，RNase-free离心管，5M NaCl，氯仿，异丙醇，75％乙醇，RNase-free水。

样品处理：

a. 先将RNase-free离心管置于干冰中再放入研磨好的冷冻的组织样品。

b. 准备新鲜植物组织，在液氮中研磨成粉状，如果是干种子，可在室温研磨。

c. 处理过的植物材料应一直保持置于－70℃冷冻保存，直至加入提取试剂并悬浮。

1. 小量提取操作步骤：(样品<0.1g，使用小规模提取方法)

1) 取不多于0.1克冷冻的研磨过的植物组织，加0.5mL提取试剂(4℃)，振荡至彻底混匀。

2) 室温放置5分钟。注意：平放离心管，使表面积最大。

3) 室温12,000rpm离心1分钟，上清转入新的RNase-free离心管。

4) 加0.1mL 5M NaCl，温和混匀。再加0.3mL氯仿，上下颠倒混匀。

5) 4℃ 12,000rpm离心10分钟，取上层水相转入新的RNase-free离心管。

注：如果提取富含多糖多酚的植物，可以加入0.3mL氯仿再抽提一遍。

6) 加与所得水相等体积的异丙醇，混匀，室温放置10分钟。

7) 4℃ 12,000rpm离心10分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加1mL 75％乙醇。(沉淀可能很难看见，应小心操作。)

8) 4℃ 5,000rpm离心3分钟。倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出，室温晾干2-3分钟。

9) 加50µL RNase-free水，反复吹打混匀以充分溶解RNA。如有絮状物，可室温12,000rpm离心1分钟，取上清转入干净的RNase-free离心管中。－70℃保存。

2. 大量提取操作步骤：(样品>0.1g到5g，使用大量提取方法)

1) 每1克冷冻的研磨过的植物组织，加5mL试剂，振荡至彻底混匀。

2) 室温放置5分钟。注意：平放离心管，使表面积最大。

3) 4℃ 10,000rpm离心1分钟，上清转入新的RNase-free离心管。每10mL上清加2mL 5M NaCl，混匀。

4) 每10mL上清加6mL氯仿，上下颠倒混匀。

5) 4℃ 10,000rpm离心15分钟，取上层水相转入新的无RNase离心管。

注：如果提取富含多糖多酚的植物，可以加入6mL氯仿再抽提一遍。

6) 测量所得水相体积，加0.9倍体积异丙醇，混匀，室温放置10分钟。

7) 4℃ 10,000rpm离心15分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加5－10mL 75％乙醇。

8) 4℃ 5,000rpm离心5分钟。小心倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体可再次离心收集，然后用枪头吸出弃掉，室温晾干3-5分钟。

9) 根据沉淀大小加RNase-free水，反复吹打混匀充分溶解RNA(如每1g叶片可加200µL水)。如有絮状物，可室温12,000rpm离心1分钟，取上清转入干净的RNase-free离心管中，－70℃保存。

问题与解决方法：

产品说明书.pdf