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产品储存:-70℃保存,避免反复冻融,一年有效。
产品介绍:
本公司生产的BL21(DE3)感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA 的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107,-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。
BL21(DE3)感受态细胞的基因型为:F - ompT hsdSB(rB -mB -) gal dcm (DE3)
产品特点:该感受态细胞用于以T7 RNA聚合酶为表达系统的高效外源基因的蛋白表达宿主。T7噬菌体RNA聚合酶基因的表达受控于λ噬菌体DE3区的lacUV5启动子,该区域整合于BL21的染色体上。该菌适合于非毒性蛋白的表达。
操作步骤:
提示
● 感受态细胞应保存在-70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
● 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
● 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。
● 感受态细胞融化后做短暂离心,可得到最大体积的感受态细胞。
以下操作均按无菌条件的标准进行:
1. 取感受态细胞置于冰浴中,如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中,置于冰浴中。
注:一次转化感受态细胞的建议用量为50μL,可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 向感受态细胞悬液中加入目的DNA(50μL的感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和),轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置30分钟。
3. 将离心管置于42℃水浴中放置60-90秒,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却2-3分钟,该过程不要摇动离心管。
注:(可选)此步骤也可将离心管置于室温进行,时间不需十分准确,夏季或室温较高时,可放置5-8分钟左右;如果室温较低,可延长时间至8-15分钟左右。
条件允许建议使用42℃热激方法。
4. 向每个离心管中加入500μL无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃ 150rpm,摇床振荡培养45分钟,目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5. 将离心管内容物混匀,吸取100μL已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上,用无菌的弯头玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。将平板置于室温直至液体被吸收,倒置平板,37℃培养12-16小时。
注:涂布用量可根据具体实验来调整。如转化的DNA总量较多,可取更少量转化产物涂布平板;反之,如转化的DNA总量较少,可取200-300μL转化产物涂布平板。如果预计的克隆较少,可通过离心(4000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于一个平板中。(涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布新的培养板)。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | AipCell BL21(DE3) Competent Cell |
规格: | 10*100uL/20*100uL |
性状: | 液体 |
储存温度: | -80℃ |
保质期: | 12个月 |
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