储存条件：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。

2. 不合适的储存于低温(4℃或者－20℃)会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储存均在室温下(15℃－25℃)进行。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：红细胞裂解液选择性裂解红细胞，然后独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解白细胞和灭活细胞RNA酶，然后用乙醇调节结合条件后，RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase Free Water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。

产品特点：

1. 不需要使用有毒的苯酚/氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2. 反复优化的红细胞裂解液配方，裂解效果快速、完全。

3. 快速简捷，单个样品操作一般可在40分钟内完成。

4. 多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.1，基本无DNA残留，可用于RT-PCR和Northern-blot等各种实验。

注意事项：

1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000 rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C或者类似离心机。

2. 需要自备乙醇和β-巯基乙醇。

3. 裂解液RLT和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4. 关于DNA的微量残留：一般说来任何总RNA提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA的微量残留，本公司的AipEasy系列RNA提取产品，由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜，在大多数RT-PCR扩增过程中极其微量的DNA残留影响不是很大，如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：

1) 选用跨内含子的引物，以穿过mRNA中的连接区，这样DNA就不能作为模板参与扩增反应。或者选择基因组DNA和cDNA上扩增的产物大小不一样的引物对。缩短延伸时间，使DNA来源模板无法参与扩增反应。

2) 将RNA提取物用RNase-Free的DNase I处理。本试剂盒还可以用于DNase I处理后的RNA清洁(cleanup)，请联系我们索取具体操作说明书。

3) 在步骤去蛋白液RW1漂洗前，直接在吸附柱RA上进行DNase I处理(货号：RE280/AipPure Dnase I柱上消化试剂盒)参见附录1。

附录1：DNA酶柱上消化(详细请参考RE280/ AipPure Dnase I柱上消化试剂盒说明书)

1. 按照前面所列RE232/AipEasy 全血RNA快速提取试剂盒(离心柱型)操作步骤操作，直到做完操作步骤7。

2. 取45μL DNase I Buffer和5μL RNase Free DNase I在离心管轻轻吹打混匀成工作液(处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液)。

3. 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12,000 rpm 离心30秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

4. 向吸附柱RA中央加入50μL的DNase I工作液，室温(20℃-30℃)放置15分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上向膜四周浸润充分和膜接触，不要让工作液滴在O型垫圈或是离心柱管壁上挂壁或者挂在垫圈上不能充分和膜接触。

5. 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12,000 rpm 离心30-60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。

6. 接操作步骤9完成后续步骤。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入指定量无水乙醇！使用前将10X红细胞裂解液RLB用DEPC处理水稀释到1X。操作前在裂解液RLT中加入β-巯基乙醇至终浓度1%，如1mL RLT中加入10μL β-巯基乙醇。此裂解液最好现用现配。配好的RLT 4℃可放置一个月。

1. 在适合大小的RNase Free离心管中加入1体积(<1.5mL)加入各种抗凝剂新鲜血液(颠倒混匀后)和3体积的红细胞裂解液RLB，颠倒混匀，可轻弹管壁，确保混匀。

2. 室温放置10分钟(期间应该颠倒轻弹混匀数次帮助裂解红细胞)。

3. 如果RNA降解严重，可在冰上裂解，但是时间可长一些以充分裂解。

4. 离心机12,000 rpm离心20秒，倒弃红色上清，并小心的尽可能多的吸弃上清(注意不要吸到管底的细胞团)，留下完整的管底白细胞团。

a) 离心后在管底应该见到白色的白细胞团，也可能有一些红细胞残片和白细胞团在一起，但是如果看到的是大部分的红色细胞团，说明红细胞裂解很不充分，应该再加入红细胞裂解液重悬细胞团后重复步骤2，3。

b) 上清尽可能的吸弃，残留过多会稀释裂解液，造成裂解结合异常，产量纯度降低。

5. 涡旋或者轻弹管壁将白细胞沉淀完全松散重悬，加入350μL(<0.5mL全血)或者600μL(0.5-1.5mL全血)裂解液RLT，吹打混匀后用手剧烈振荡20秒，充分裂解。病人正常血样白细胞数量为4000-7000/μL，如果血样中白细胞数量可能大幅增加，应该适当减少处理量。或者按照350μL(<2x106白细胞)或者600μL(2x106-1x107白细胞)比例加RTL。

6. 用吸头吹打混匀帮助裂解或者剧烈涡旋震荡直到得到满意匀浆结果(或者电动匀浆30秒)，可以剪切DNA，降低粘稠度和提高产量。

7. 较精确估计裂解物体积，加入等体积的70%乙醇(请先检查是否已加入无水乙醇!)，此时可能出现沉淀，但是不影响提取过程，立即吹打混匀，不要离心。

8. 立刻将混合物(每次小于700μL，多可以分两次加入)加入一个吸附柱RA中，(吸附柱放入收集管中)13,000 rpm离心60秒，弃掉废液。

9. 加700μL 去蛋白液RW1，室温放置1分钟，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

10. 加入500μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000 rpm 离心30秒，弃掉废液。加入500μL漂洗液RW，重复一遍。

11. 将吸附柱RA放回空收集管中，13,000 rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

12. 取出吸附柱RA，放入一个RNase Free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μL RNase Free Water(事先在70-80℃水浴中加热效果更好)，室温放置1分钟，12,000 rpm 离心1分钟。

13. 如果提取全血>0.5mL或者>2x106白细胞，加30-50μL RNase Free Water重复步骤11，可以得到更多的RNA，或者使用第一次的洗脱液加回到吸附柱重复步骤一遍(如果需要RNA浓度高)。

注：洗脱两遍的RNA洗脱液浓度高，分两次洗脱后如果合并洗脱液的RNA产量比前者高15–30%，但是浓度要低，用户根据需要选择。

产品说明书.pdf