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储存条件:本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1. 因此运输和储存均在室温下(15℃-25℃)进行。裂解液RLS可以常温运输,收到后4℃避光可长期保存,常温保存3个月也不影响使用质量。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:改进的异硫氰酸胍/酚一步法(液体样品专用TRIzol LS法)裂解细胞和灭活RNA酶,然后总RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除,最后低盐的RNase free water将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品特点:
1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。
2. 结合了异硫氰酸胍/酚一步法试剂稳定性好,纯度高和离心柱方便快捷的优点,不需要异丙醇沉淀和乙醇洗涤过程,RNA可以直接从离心柱上洗脱避免了过度干燥不易溶解问题。
3. 独有的裂解液RLS配方,可直接裂解全血,不需要先裂解去除红细胞。
4. 多次漂洗去蛋白过程,提取RNA纯度更高。
5. 有效的去除了5S在总RNA中含量,提高了纯度。
注意事项:
1. 第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2. 本试剂盒抑制RNA酶效果极佳,所有离心步骤如未加说明,均可在常温进行。
3. 裂解液RLS和去蛋白液RE中含有刺激性有害化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
4. 考虑到环保问题,本试剂盒不含有实验室常用试剂氯仿,使用前需要自备氯仿。
5. 常规的琼脂糖凝胶电泳和变性胶电泳均可以用来分析RNA的质量。好的RNA产物在电泳后应该可以看到明显的二条优势核糖体RNA带,分别为~5Kb(28S),~2Kb(18S),条带亮度比值约为2:1。有时候也可以看到~0.1kb和0.3Kb(5S,tRNA)带。但有时候根据不同的物种如某些植物组织可以看到4,5条带也属于正常现象,如果RNA未成熟的前体或者不均一核RNA、小核RNA提取出来也可能看到介于7Kb和15Kb之间的不连续的高分子量条带。
6. 检测OD260/OD280吸光度比值时,如需稀释RNA样品应该用TE(PH 8),如果用水稀释后检测,由于一般水离子强度和PH值低,会使OD280升高,从而使比值降低。
7. 加入裂解液RLS匀浆后,加氯仿前,样品可在 –60℃-70℃ 保存一个月以上。
8. 若提取细菌RNA,推荐:AipPure 细菌RNA快速提取试剂盒(离心柱型)(货号:RE260)和AipPure Plus 细菌RNA快速提取试剂盒(离心柱型)(货号:RE261)。
操作步骤(实验前请先阅读注意事项):
提示:第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量无水乙醇!
1. 取0.25mL 血液(或血清,血浆,脑脊液等等)加入0.75mL 裂解液RLS,用加样枪吹打液体样品几次以帮助裂解样品中细胞。裂解液RLS 和液体样品的终体积比总是3:1。
2. 将样品剧烈震荡混匀后,在室温静置5分钟以使核蛋白体完全分解。
3. 加0.2mL 氯仿,剧烈振荡15秒并室温静置2分钟。
4. 于4℃ 13000rpm 离心10分钟,样品会分成三层:下层有机相,中间层和上层无色的水相,RNA存在于水相中。水相层的容量大约为所加入裂解液RLS体积的60%,把水相转移到新管中,进行下一步操作。
5. 加入0.5 倍体积无水乙醇,颠倒混匀(此时可能会出现沉淀)。得到的溶液和可能沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内)。
6. 室温(以下步骤均为室温)13000rpm 离心30秒,弃掉废液,将吸附柱重新套回收集管。
7. 加500 μL去蛋白液RE,12000rpm 离心30秒,弃掉废液。
8. 加入500 μL漂洗液RW(请先检查是否已加入无水乙醇!),12000rpm 离心15秒,弃掉废液。
9. 重复一遍步骤8。
10. 将吸附柱RA放回空收集管中,13000rpm 离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
11. 取出吸附柱RA,放入一个RNase-free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加30-50μl的RNase-free water(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,13000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μL的RNase-free water,离心1分钟,合并两次洗脱液。
注:如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积最好不少于30μL,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | AipPure TRIzol LS Ultra-Speed Whole Blood Total RNA Extraction Kit(Centrifugal Column) |
规格: | 50T |
性状: | 液体 |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
产品说明: | 收到产品后,请尽快按照试剂盒内各组分的储存温度保存! |
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