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产品储存:本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1. 所有的溶液应该是澄清的,如果环境温度低时溶液可能形成沉淀,此时不应该直接使用,可在37℃水浴加热几分钟,即可恢复澄清。
2. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化,各溶液使用后应及时盖紧盖子。
产品介绍:本试剂盒使用离心吸附柱硅基质膜全部采用进口特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。在高盐条件下RNA与硅胶吸附膜高效、专一地结合,同时最大限度除去蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等,在低盐条件下,RNA被洗脱。可处理的RNA样品量可高达50μg。本试剂盒用于从酶反应液(如DNase处理、蛋白酶处理、RNA标记等)中纯化回收RNA,也可用于从其它方式提取获得的RNA的纯化。纯化的总RNA没有蛋白的污染,所得的RNA可用于Northern blot、Dot blot、mRNA提取、cDNA合成、引物延伸、差异显示等。
操作步骤:
提示:第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!以下所有步骤均可以在室温进行,但是应该迅速操作,减少RNA降解机会。
1. 冰上RNA样品加入RNase-free Water补足至100μL,加入350μL溶液RC,混匀。
2. 加入250μL无水乙醇,混匀,无需离心。
3. 上一步所得溶液和可能有的沉淀一起转入吸附柱RA中(吸附柱套在收集管内),4℃ 12,000rpm 离心45秒,弃掉收集管中的废液,将吸附柱重新套回收集管。
注:如需去除DNA微量残留,可在本步骤后进行DNA酶柱子上直接消化,详见附录。
4. 加0.5mL漂洗液RW(请先检查是否已加入乙醇),4℃ 12,000rpm 离心45秒,弃废液。
5. 加0.5mL漂洗液RW,4℃ 12,000rpm 离心45秒,弃废液。
6. 4℃ 13,000rpm 离心2分钟,尽量除去漂洗液,以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
7. 取出吸附柱RA,放入一个RNase-free离心管中,根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50-80μL RNase-free Water(事先在65-70℃水浴中加热效果更好),室温放置2分钟,12,000rpm 离心1分钟。如果需要较多RNA,可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中,离心1分钟,或者另外再加30μL RNase-free Water,离心一分钟,合并两次洗脱液。
注:洗脱体积越大,洗脱效率越高,如果需要RNA浓度较高,可以适当减少洗脱体积,但是最小体积最好不少于30μL,体积过小降低RNA洗脱效率,减少RNA产量。
附录:DNase I柱上消化
本试剂盒还可以进行离心柱上DNA酶消化以去除RNA样品中微量DNA污染,如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR,可以购买各种商品化的RNase-free DNase直接在离心吸附柱子RA上面消化DNA,然后纯净RNA可以洗脱下来直接使用。客户可根据需要向本公司购买去蛋白液RW1。
以AipPure Dnase I 柱上消化试剂盒(RNase-free)举例(爱普科学货号:RE280)
*DNase I 工作液的配制:取45μL DNase I Buffer和5μL RNase-free DNase I 离心管轻轻吹打混匀成工作液(处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液)。
注:如果残留DNA过多导致消化不完全,可按比例加大使用酶量来提高消化效果(如:90μL DNase I Buffer和10μL RNase-free DNase I)。
*操作步骤:
1. 前面按照正常步骤操作,在步骤3完成后按照以下步骤操作。
2. 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1,12,000 rpm 离心30秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
3. 向吸附柱RA中央加入50μL的DNase I工作液,室温(20-30℃)放置15分钟。注意直接将工作液滴在膜中央上,不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。
4. 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1,12,000rpm 离心30-60秒,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
5. 接漂洗液RW步骤等后续步骤。如果是其它公司试剂盒,则接最后的一个漂洗液漂洗等后续步骤。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | AipPure RNA Purification Kit(Centrifugal Column) |
规格: | 50T |
储存温度: | RT |
保质期: | 12个月 |
产品说明: | 收到产品后,请尽快按照试剂盒内各组分的储存温度保存! |
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