产品储存：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。

储存事项：

1. 第一次使用时，将试剂盒所带全部的RNase A加入溶液P1后(终浓度100μg/mL)置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

2. 环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出出现浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清，不要剧烈摇晃，以免形成过量的泡沫。

3. 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

产品介绍：

    本试剂盒采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低pH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除，最后低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。

    本试剂盒提取的质粒纯度很高，并去除了大部分内毒素，除用于常规的PCR、酶切、转化等实验外，还可以直接用于原生质体转染等一般的转染实验。如果对于转染要求特别高的客户，需要提取的质粒内毒素含量极低的话，可以选择本款试剂盒的升级版本：PE403/ AipFast Plus 无内毒素高纯度快速质粒大提试剂盒(离心柱型)，升级版本(货号：PE403)配备了爱普科学独家的专用内毒素清除剂，提取的质粒内毒素含量极低(<0.1 EU/ug DNA)，当然，操作流程上也较本款试剂盒稍微复杂几步，客户可以根据自己具体的实验需求进行选择。

产品特点：

1. 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好，克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。

2. 独有的去蛋白液配方，可以高效去除残留的核酸酶，即使是核酸酶含量丰富的菌株如JM系列、HB101也可以轻松去除，有效防止了质粒被核酸酶降解。

3. 不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

4. 快速方便，从150-300mL大肠杆菌LB((Luria-Bertani)培养液中，可快速提取0.5-2mg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达80%左右。

5. 获得的质粒产量高、超螺旋比例高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。

注意事项：

1. 所有的离心步骤如未加另外说明均在室温完成，使用转速可以达到12,000xg，带50mL转头的台式离心机。

2. 提取质粒的量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、N3的用量，洗脱缓冲液应在70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，提高提取效率。

3. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/mL DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成，与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。

4. 质粒DNA确切分子大小，必须酶切线性化后，对比DNA分子量Marker才可以知道。处于环状或超螺旋状态的质粒，泳动位置不确定，无法通过电泳知道其确切大小。

5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保pH大于7.5，pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，质粒应该保存－20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱(10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0)，但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

操作步骤(实验前请先阅读注意事项)：

提示：第一次使用前请先在漂洗液WB和去蛋白液PE瓶中按照该组分标签上的指示，加入指定量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入！将RNase A全部加入溶液P1中，混匀。每次使用后置于2-8℃保存。

1. 取150-200mL(最多不超过300mL)过夜培养的菌液，12,000xg(约10,000rpm)，离心1-2分钟，尽可能的倒干上清，收集菌体。

注：收集超过50毫升菌液，可以离心弃上清后，在同一个50mL管内加入更多的菌液，重复步骤1，直到收集到足够的菌体。

2. 用7.5mL溶液P1重悬菌体沉淀，移液器吹打或者涡旋振荡至彻底悬浮。

注：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。

3. 加7.5mL的溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解，室温放置4-5分钟。

注：温和地混合，不要剧烈震荡，以免基因组DNA剪切断裂！所用时间不应超过5分钟！以免质粒受到破坏。此时菌液应变得清亮粘稠。如果很浑浊，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。

4. 加7.5mL溶液N3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀此时会出现白色絮状沉淀。12,000xg离心10-15分钟，小心取上清至新管，避免吸取到漂浮的白色沉淀。

注：加入溶液N3后应该立即混匀，以免产生SDS的局部沉淀。

5. 向上清中加入0.5体积异丙醇(约10mL)后充分颠倒混匀后分多次(每次不超过10mL，因个别情况下离心机转子倾角较大，建议加入吸附柱的溶液体积不超过10mL，以防产生漏液现象)转入吸附柱DC中(吸附柱放入收集管中)，12,000xg离心1分钟，倒掉收集管中的废液。直到所有混合溶液通过此吸附柱。

6. 加入10mL去蛋白液PE(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000xg 离心1分钟，弃掉废液。

注：此步骤为了去除痕量核酸酶等杂质，如所用菌株为JM系列、HB101等endA菌株或野生型菌株，核酸酶含量丰富，应加此步骤；如所用菌株为XL-1 Blue、Top10和DH5α等缺陷型菌株，核酸酶含量低，则可略过此步骤。

7. 加入10mL漂洗液WB(请先检查是否已加入无水乙醇!)，12,000xg 离心1分钟，弃掉废液。再加入10mL漂洗液WB，重复漂洗一次。

8. 将吸附柱DC放回空收集管中，最高速(最好大于12,000xg)离心3分钟以干燥基质膜上残留乙醇。打开盖子室温晾干2-3分钟。

注：该步骤为彻底去除吸附柱中残留乙醇，残留乙醇抑制下游反应并且严重降低洗脱效率，降低质粒产量。

9. 取出吸附柱DC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加1-2mL洗脱缓冲液EB(洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热可提高产量)，室温放置2分钟，12,000xg离心1-2分钟。

推荐：为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1分钟，12,000xg 离心1-2分钟。洗脱两遍可提高浓度约10%。

注：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要质粒浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是需注意体积过小降低质粒洗脱效率，减少质粒产量(最小不应少于1mL)。

产品说明书.pdf