- 产品介绍
- 商品属性
- 资料下载
- 产品问答
产品储存:-20℃避光保存,保质期至少12个月,使用前充分融解混匀。2× miRNA qPCR Mix(With SYBR Green)短期使用可放在4℃,避免反复冻融。Reverse primer(10μM)每次用完置-20℃保存。
制品说明:
1. 增强型miRNA荧光定量PCR检测试剂盒采用本试剂盒采用SYBR® Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。
2. 本试剂盒包含miRNA荧光定量检测的所有试剂,包括2× miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2× miRNA qPCR Mix(含SYBR Green)是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,其中的DNA polymerase采用的是抗体修饰的热启动形式,配合特殊的Buffer体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内进行准确定量。
注:该试剂盒须与miRNA cDNA第一链合成试剂盒(增强型)(货号:MP101-01)配套使用。
需自备的试剂:
1. 分子生物学实验级别的水(无核酸酶)
2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物(Forward primer)
Forward Primer设计原则:
1. 遵循引物设计的最普遍原则。
2. 以成熟的miRNA序列为基础,将U替换成T,这是最基础和最简单的设计方法。
3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm值为65℃,设计上游引物的Tm值要尽量保证在65℃左右。
4. 若按照原则2的方式直接设计的引物其Tm值过低,可以在引物的5'端添加几个碱基(最好为G 或C 碱基);也可以在3'端添加1个或几个A碱基;或者5'端和3'端同时添加。
5. 若按照原则2的方式直接设计的引物其Tm值过高,可以在引物的5'或3'端去掉几个碱基。
操作步骤:
1. 在室温融化2× miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μM)。
2. 使用时请将2× miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合,避免起泡,并经轻微离心后使用。如果试剂没有混匀,其反应性能会有所下降。
注:请不要使用振荡器混匀。
3. 按照下表组分冰上进行反应液的配制:
Components | Volumn | Final Concentration | |
2× miRNA qPCR Mix(With SYBR Green) | 25μL | 10μL | 1× |
Forward primer(10μM) | 1μL | 0.4μL | 0.2μM |
Reverse primer(10μM) | 1μL | 0.4μL | 0.2μM |
miRNA第一链cDNA | xμL | xμL | __ |
ddH2O to final volume | 50μL | 20μL |
注:提高特异性选择两步法。提高扩增效率选择三步法。
注意事项:
1. miRNA第一链cDNA的加入量不要超过Real-Time PCR体积1/10。
2. 对于特殊的检测体系中,高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增,根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(5-10倍或者100倍)。使用富集的miRNA做起始模板,可降低非特异扩增,提升敏感度。
3. 本品中含有荧光染料SYBR Green I,保存本品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4. 2× miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX,客户须根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加入ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,配套爱普科学的ROX Reference Dye(100×)参比染料(货号:FP307)。
5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
6. 本制品仅供科研使用,严禁用于临床和诊断等用途。
品牌: | 爱普科学 |
产品别名: | 增强型miRNA荧光定量PCR检测试剂盒 |
规格: | 125次*20uL |
性状: | 液体 |
储存温度: | -20℃ |
保质期: | 12个月 |
产品说明: | 该试剂盒配套RT517-01试剂盒一起使用! |
最新发布
-
PVDF免疫印迹膜 PVDF Western Blotting Membranes 0.2um 30cm*3M
一般描述PVDF免疫印迹膜是疏水性的聚偏二氟乙烯(PVDF)...
¥2451 -
针式过滤器,焊接式,PVDF/亲水聚偏氟乙烯,13mm*0.45um(进口膜)
针式过滤器 进口膜 焊接式 PVDF(亲水聚偏氟乙烯) 13...
¥340 -
透析袋(宽10MM/直径6MM/1000分子量)
透析袋,宽10MM,直径6MM,1000分子量
¥530 -
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE),100mg/1ml
Purer Al2O3-N 中性氧化铝固相萃取柱(SPE) ...
¥400