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Enhanced miRNA qPCR Assay kit

货号:MP102-01

品牌:爱普科学

货期:现货

价格:550

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产品储存:-20℃避光保存,保质期至少12个月,使用前充分融解混匀。2× miRNA qPCR Mix(With SYBR Green)短期使用可放在4℃,避免反复冻融。Reverse primer(10μM)每次用完置-20℃保存。

制品说明:

1. 增强型miRNA荧光定量PCR检测试剂盒采用本试剂盒采用SYBR® Green I 嵌合荧光法的原理进行miRNA荧光定量检测。

2. 本试剂盒包含miRNA荧光定量检测的所有试剂,包括2× miRNA qPCR Mix和Reverse primer。2× miRNA qPCR Mix(含SYBR Green)是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂,其中的DNA polymerase采用的是抗体修饰的热启动形式,配合特殊的Buffer体系,使反应特异性更好,灵敏度更高,并能在更广的范围内进行准确定量。

注:该试剂盒须与miRNA cDNA第一链合成试剂盒(增强型)(货号:MP101-01)配套使用。

需自备的试剂:

1. 分子生物学实验级别的水(无核酸酶)

2. 待检测miRNA对应的qPCR上游引物(Forward primer)

Forward Primer设计原则:

1. 遵循引物设计的最普遍原则。

2. 以成熟的miRNA序列为基础,将U替换成T,这是最基础和最简单的设计方法。

3. 试剂盒中提供的下游引物的Tm值为65℃,设计上游引物的Tm值要尽量保证在65℃左右。

4. 若按照原则2的方式直接设计的引物其Tm值过低,可以在引物的5'端添加几个碱基(最好为G 或C 碱基);也可以在3'端添加1个或几个A碱基;或者5'端和3'端同时添加。

5. 若按照原则2的方式直接设计的引物其Tm值过高,可以在引物的5'或3'端去掉几个碱基。

操作步骤:

1. 在室温融化2× miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μM)。

2. 使用时请将2× miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合,避免起泡,并经轻微离心后使用。如果试剂没有混匀,其反应性能会有所下降。

注:请不要使用振荡器混匀。

3. 按照下表组分冰上进行反应液的配制:

Components

Volumn

Final Concentration

2× miRNA qPCR Mix(With SYBR Green)

25μL

10μL

1×

Forward primer(10μM)

1μL

0.4μL

0.2μM

Reverse primer(10μM)

1μL

0.4μL

0.2μM

miRNA第一链cDNA

xμL

xμL

__

ddH2O to final volume

50μL

20μL


Enhanced miRNA qPCR Assay kit(图1)

注:提高特异性选择两步法。提高扩增效率选择三步法。

注意事项:

1. miRNA第一链cDNA的加入量不要超过Real-Time PCR体积1/10。

2. 对于特殊的检测体系中,高含量的cDNA模板易导致非特异性扩增,根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(5-10倍或者100倍)。使用富集的miRNA做起始模板,可降低非特异扩增,提升敏感度。

3. 本品中含有荧光染料SYBR Green I,保存本品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

4. 2× miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX,客户须根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加入ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差,配套爱普科学的ROX Reference Dye(100×)参比染料(货号:FP307)

5. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

6. 本制品仅供科研使用,严禁用于临床和诊断等用途。

品牌: 爱普科学
产品别名: 增强型miRNA荧光定量PCR检测试剂盒
规格: 125次*20uL
性状: 液体
储存温度: -20℃
保质期: 12个月
产品说明: 该试剂盒配套RT517-01试剂盒一起使用!
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